C6200-Biochemické metody
14C_MĚŘení rychlých reakcí
Petr Zbořil

Rychlé děje
•
•Studium nerovnovážných stavů
•Problém zaznamenání dat
•Série měření v intervalu s
•Rozdíly ca ms
•
•
•
•
•
•
•
•
•

Monitorování rychlých reakcí
•Rychlé smíchání – mixer, turbinka
–Kontinuální tok
•Dlouhodobě probíhající reakce
•Parametry konstantní v místě = udržují se průtokem
•Registrace dlouhodobá
•Velká spotřeba materiálu
–Zastavený tok
•Změna parametrů v čase
•Rychle reagující detektory – záznam dat
•Menší spotřeba materiálu
•

Kontinuální tok
•Místo smíchání reaktantů – t = 0
–ti  = l/v, v = w/S – kapilára – vyšší v
–Detektor se přemisťuje

Zastavený tok
•„Stopped flow“
–Rychlá injektáž reaktantů (pneumatický náraz)
–Zastavení toku zarážkou
–Rychle reagující detektor (vč. pH apod.) a záznam dat
–

Užití
•Prestacionární kinetika
–Enzymové reakce – k
–Disociační pochody – k
–Vazebné studie – koenzymy apod.
•Y = f(t) – příklad vazby
–Y=Ym(1 – e-rt)       r pro řadu [L0]
–L0 = volný ligand
–r = k-1 + k1[L0]
•
•

Relaxační techniky
•
•Přechod z S1 do S2
–Y = Σmi=1 ai . e-bit
•m – počet forem, stavů
–např. E, S, ES
–Ag, Ab, AgAb
–Mf, Lf, Lb
•a – konstanta složky - příspěvek
•b – relaxační konstanta

Relaxační techniky
•
•Změna relevantního parametru
–Perturbace směsi
–Rychlá změna T, p
•Teplotní skok
•Tlakový skok
–Změna složení směsi – nová rovnováha
•Klasicky stanovení parametrů v rovnováze
•Rychlé měření během přechodu

•Rychlá změna teploty
–Výboj kondenzátoru – dodání tepla
•Biochemicky významné
•
Teplotní skok

Tlakový skok
•Změna tlaku
–Dekomprese – rychlé uvolnění jehlou
•Několikanásobky atm. tlaku

•
•
•
•DĚkuji za pozornost
5/12/2016
Footer Text
11