Transgenní živočichové (komentáře) 
 
Stránka 2 
Metoda  infekce  ranných  zárodků  (4‐8  buněk)  retroviry  in  vitro  se  moc  nepoužívá  …  často  vznikají 
genetické mozaiky, variabilita v genové expresi z transgenu (epigenetika), letalita, … 
 
Stránka 3 
Transgenní myši již byly připraveny řadou různých metod (viz schéma) – ale standardně se používají 
ty dvě základní metody 
 
Stránka 4 
Historicky  starší  technika,  odběr  vajíček  3‐5  hodin  po  oplození,    implantuje  se  více  vajiček  –  více 
potomků,  začlenění  transgenu  ještě  neznamená  expresi  –  např.  začlenění  do  oblastí 
heterochromatinu, inzerční mutageneze (až 10% myší patologický fenotyp) 
 
Stránka 7 
chimérická myš ‐ nutno další křížení pro zisk transgenní myši 
 
Stránka 9 
Chiméry – různě stupeň chimerismu, pro křížení se vybírají ty nejvíce chimerické, heterozygotní myši 
jsou v tomto případě tmavé, ty následně křížím mezi sebou, abych získal homozygota 
 
Stránka 12 
pozitivně‐negativní selekce, gen neo přerušuje gen zájmu – buňky nesoucí transgen kdekoli začleněný 
jsou rezistentní k G418, TK (tymidinkináza) vně homologních oblastí – po homologní rekombinaci se 
nazačlení,  při  náhodném  začlenění  ano,  ganciclovir  je  přeměněn  TK  na  cytotoxický  produkt  – 
kombinací  G418/ganciclovir  tedy  selektuji  buňky,  kde  nejspíš  došlo  k HR,  nutno  ověřit  následně 
sekvenací genomu 
 
 
 
Stránka 16 
A  je  gen  zájmu,  M  je  nějaký  marker  (neo),  dnes  už  existují  i  různé  typy  LoxP  sekvencí  (viz  dále 
Brainbow myš) 
 
Stránka 17 
Analogie Cre‐loxP systému 
 
Stránka 18 
Cílový vektor nese na krajích homologní oblasti – krátkou a dlouhou (SHA, LHA) 
 
Stránka 19 
Využití  různých  kombinací  loxP  sekvencí.  Mutuálně  exkluzivní  a  náhodná  rekombinace  –  buňky 
„barevné“  dle  principu  náhodného  skládání  barev.  Myš  s tímto  konstruktem  se  kříží  s myší 
produkující  Cre  rekombinázu  pod  tkáňově  specifickým  promotorem  (v  tomto  případě  neurogenní 
promotor – sledujeme produkci fluorescenc´čních proteinů v mozku). Využití – odlišení jednotlivých 
buněk na histologických řezech, trasování původu/migrace buněk, atd. 
 
Stránka 22 
U  myší  se  tetracyklin/doxycyklin  přidává  do  pití,  v  buněčné  kultuře  klasicky  do  kultivačního 
média.Transgenem může být i gen pro Cre rekombinázu – tedy indukujeme následné vyštěpení loxP 
míst a změnu genomu v určitém námi zvoleném čase. 
 
Stránka 24 
Analogie loxP systému. Aktivita rekombinázy ale regulovaná přítomností tamoxifenu. Tedy jiná forma 
inducibilního systému. 
 
Stránka 28 
Začlenění je náhodné a sledujeme expresi markerového genu (třeba i GFP, lacz …), identifikujeme 
místo začlenění (gen X), a víme nyní o něm kdy a kde se exprimuje.  
 
 
Stránka 41 
U ryb je cílem především rychlejší růst 
 
Stránka 44 
Pharming se dříve používalo, aby se zdůraznilo, že seve zvířatech připravují farmakologicky významné 
látky 
 
Stránka 45 
Velká a kontinuální produkce mléka – zisk hodně proteinu, ekonomicky výhodné 
Lysozym nebo lysostafin – brání bakteriálním infekcím (mastitidy) – mléko krávy se zánětem nelze 
použít pro člověka, ekonomické ztráty 
 
Stránka 47 
Polly – připravena obdobně jako Dolly, ale navíc vnesen gen pro koagulační faktor IX (léčba hemofilie) 
– Polly je tedy klonovaná a zaroven transgenní ovce 
 
Stránka 48 
Trypanozomy  (prvok)  přenáší  spavou  nemoc  –  mezihostitelem  je  hmyz  (př.  plostice),  přenos 
geneticky modifikovaných bakterií do střeva toho hmyzu – produkce toxinu – usmrtí Trypanozomy, 
pokud  se  takové  ploštice  rozšíří  –  mohlo  by  to  vést  ke  snížení  výskytu  této  choroby  (obdobně  i 
malárie)