Úvod do elektronové mikroskopie, TEM Bi8920 Pokročilé mikroskopické metody Josef Jaroš Ústav histologie a embryologie Lékařská fakulta, Masarykova univerzita http://triton.paru.cas.cz/old-lem/book/Podkap/Pic/2.1/4.gif Srovnání rozměrů a rozlišení Atom vodíku = 0,529-10 m = 0,05 nm Jádro atomu = 10-15 m = 1 fm Co je elektronová mikroskopie •EM je diagnostický nástroj , který umožňuje unikátní vhled do –morfologie vzorku •tvar a velikost částic (TEM) –topologie •povrchové vlastnosti (SEM) –struktury, uspořádání •krystalografické vlastnosti (Elektronová difrakce) –složení materiálů •prvkové složení (Analytická EM) Elektronová mikroskopie, spolu s využitím rentgenového záření a dalších technik, významně podpořila vznik oboru molekulární biologie. Mikroskop musí poskytnout Rozlišení Schopnost přenést informaci o jemných detailech ze vzorku do obrazu Kontrast Rozdíly v obrazu mezi hlavním prvkem a pozadím Zvětšení Vytvořit obraz dostatečné velikosti, aby byly okem rozeznatelné podrobnosti. http://cmp.felk.cvut.cz/%7Ecechj/student_projects/facial_video_superresolution.jpg http://shutter.t-dimension.com/wp-content/uploads/2011/04/031high-contrast.jpg Rozlišovací schopnost lidského oka https://lh3.googleusercontent.com/proxy/qsF-Dc99SCk25qNDVQkpNjbM-t0UXpJ_GFEBXJbFWgZjfeN0VI_DkmXItlg cRqB_6hBWphiyDrxWEVh38vPUD_dch0LLgRog4PY Rozlišovací schopnost d je minimální vzdálenost pro rozlišení dvou bodů – „mravenců“). Čočkou, či soustavou čoček lze objekty a tuto vzdálenost zvětšovat, čili je pak možné rozlišit body, které jsou si blíž. d d Oko je schopno rozlišit 2 objekty – „mravence“ Oko není schopné rozlišit 2 objekty Rozlišovací schopnost však pro optické systémy souvisí s vlnovou délkou světla λ. Abbe odvodil rovnici, ze které vyplývá, že R.S. ≈ 0,5 λ. Čili pro modré světlo (400 nm) platí, že ani silnější světelný mikroskop neumožní rozlišit body vzdálené méně než 200 nm. Proč elektrony? •Elektron má náboj – negativní •Elektron je velmi lehký - 1800x lehčí než jaderné částice •Je výrazně jednodušší elektrony uvolnit z orbitalů • •=> je možné elektrony urychlit v elektrickém poli • •Když se uvolní elektrony z atomů ve vakuu, chovají se jako světlo • •Napětím lze regulovat délku vlny elektronu • •Při 100 kV je vln délka 0,0038 nm. • •Ačkoliv v současnosti jsou TEMy využívány s rozlišením 0,1 nm. Vyšší rozlišení znamená technické obtíže. Atom vodíku = 0,529-10 m = 0,05 nm Jádro atomu = 10-15 m = 1 fm Proton Neutron Elektron Vlnové vlastnosti •V roce 1924 de Broglie postuloval dualitu částice a vlnění, tzn. každá částice se může projevovat jako vlnění a naopak. • •Veškerá pohybující se částice má vlastnosti vlny s vln. délkou λ, která je nepřímo úměrná momentu hybnosti částice p. • • • (h - Planckova konstanta; m - hmotnost; v - rychlost) • • •Myšlenku duality částic a vlnění zavedl v roce 1905 Albert Einstein pro objasnění fotoelektrického jevu. Později byla experimentálně potvrzena i v souvislosti s jinými jevy. The Wave Properties• In 1924, the wave-particle dualism waspostulated by de Broglie (Nobel Prize 1929).• All moving matter... https://cs.dbpedia.org/page/Dualita_%C4%8D%C3%A1stice_a_vln%C4%9Bn%C3%AD https://www.wikiskripta.eu/w/Vlnov%C4%9B-korpuskul%C3%A1rn%C3%AD_dualismus Doplňkové informace Jak je rozlišovací schopnost ovlivněna vlnovou délkou © 2013 FEI resolution-wavelength-panel-top.png resolution-wavelength-panel-bottom.png bottom-wavelength.png top-wavelength.png dlouhá vlna krátká vlna Související obrázek Zdroj elektronů (elektronové dělo) •Zdrojem elektronů je ohnutý vodič-vlákno, kterým protéká proud – to je katoda • –Nejčastější materiály vlákna •Wolfram (W) •Thermionin (LaB6) •Schottky (ZrO/W) –Rozdíly jsou v ceně a vlastnostech – zejména jasu • •Elektrony v ohybu vypadávají, proletují štěrbinou a následně jsou urychleny směrem k anodě Shottkyho vlákno Směřování elektronového paprsku •kondenzorová „čočka“ (elektromagnetická cívka) soustředí svazek elektronů na preparát •„čočky“ objektivu a projektivu (další elektromagnetické cívky) směřují elektrony, které prošly preparátem, na fluorescenční stínítko nebo speciální kameru, kde se vytváří obraz. •Stínítko umožňuje převedení elektromagnetického vlnění na světlo. • Kondenzorová čočka Vzorek Řez tkáně Čočka objektivu Čočka okuláru Čočka projekční Zdroj elektronů Zdroj světla (lampa) Fluorescenční stínítko nebo/a kamera Oko nebo kamera Elektrony dopadají na vzorek •Schémata interakce elektronů s hmotou po jejich dopadu •Pro TEM musí být preparát dostatečně tenký, aby elektrony prošly •Elektrony, která vzorkem projdou – ale nereagují s ním, vytváří na fluorescenčním stínítku / kameře světlé body 1 2 3 1 Elektronový svazek (primární elektrony) E0 = 0,1-30 keV Vzorek Rozptyl elektronů Sekundární elektrony E ≤ 50 eV Odražené elektrony 50 eV < E ≤ E0 Auger/Rentgen/ Katodoluminiscence + - - - - - - Atom vzorku Primární elektrony Neelastický rozptyl elektronů (malý úhel) E= E0 -dE Elastický rozptyl elektronů (velký úhel) E= E0 Průchod elektronů bez rozptylu E0 Elektrony dopadají na vzorek •Schémata interakce elektronů s hmotou po jejich dopadu •Pro TEM musí být preparát dostatečně tenký, aby elektrony prošly •Elastický rozptyl ohybem dráhy v blízkosti jádra způsobí odklonění elektronů – žádná energie není z elektronu přenesena do vzorku – el. nedopadnou na stínítko a jsou registrovány jako tmavá místa vzorku – tento rozptyl je pro TEM zásadní 2 Elektronový svazek (primární elektrony) E0 = 0,1-30 keV Vzorek Rozptyl elektronů Sekundární elektrony E ≤ 50 eV Odražené elektrony 50 eV < E ≤ E0 Auger/Rentgen/ Katodoluminiscence 1 2 3 + - - - - - - Atom vzorku Primární elektrony Neelastický rozptyl elektronů (malý úhel) E= E0 -dE Elastický rozptyl elektronů (velký úhel) E= E0 Průchod elektronů bez rozptylu E0 Elektrony dopadají na vzorek •Schémata interakce elektronů s hmotou po jejich dopadu •Pro TEM musí být preparát dostatečně tenký, aby elektrony prošly •Neelastický rozptyl elektronů – reakce s elektrony vzorku –způsobuje malý odklon elektronu a tyto vytváří v obraze vzorku nespecifické rozmazání – pro TEM je nežádoucí –navíc část energie z elektronu je přenesena do vzorku, tzn. –změní se vlnová délka elektronu 3 1 2 3 + - - - - - - Atom vzorku Primární elektrony Neelastický rozptyl elektronů (malý úhel) E= E0 -dE Elastický rozptyl elektronů (velký úhel) E= E0 Průchod elektronů bez rozptylu E0 Elektronový svazek (primární elektrony) E0 = 0,1-30 keV Vzorek Rozptyl elektronů Sekundární elektrony E ≤ 50 eV Odražené elektrony 50 eV < E ≤ E0 Auger/Rentgen/ Katodoluminiscence Druhy signálů vznikající při interakci pevné látky se svazkem urychlených elektronů, informace které poskytují a metody, kterými je možné je zachytit a analyzovat Doplňkové informace https://www.luolangli.com/microscopy https://is.muni.cz/do/rect/el/estud/lf/js19/mikroskopicky_atlas/web/index.html TEM vzorku kosti (tkáň byla kontrastována těžkými kovy) Většina eletronů prošla tímto místem až na stínítko V místě membrány buňky je vyvázán těžký kov, který způsobil odklon většiny elektronů, nebo jeho pohlcení Skenovací elektronový mikroskop (SEM) Kondenzor Vzorek Řez tkáně Čočka objektivu Čočka okuláru Čočka projekční Zdroj elektronů Zdroj světla (lampa) Kondenzor Vychylovací Cívka (Usměrňovač svazku) Fotonásobič a detektor odražených elektronů Čočka objektivu Zpětně odražené elektrony Stínítko nebo kamera Oko nebo kamera Pokovený vzorek Směřování paprsku u SEM •kondenzorová „čočka“ (elektromagnetická cívka) soustředí svazek elektronů do malého místa (méně než 4 nm v průměru) na preparátu •směřování svazku elektronů je regulováno usměrňovačem svazku, což umožňuje skenování preparátu řádek po řádku •z povrchu pozorovaného objektu jsou vyráženy sekundární elektrony, které jsou zaznamenávány detektorem elektronů a zesilovány fotonásobičem •obraz povrchu pozorovaného objektu vzniká podobně jako u skeneru – rastrováním povrchu elektronovým svazkem TEM SEM Elektronový svazek široký, statický fokusovaný do bodu, vychylovaný řádek po řádku Urychlovací el. napětí v rozsahu 60-300.000 voltů Urychlovací napětí mnohem nižší, netřeba penetrovat vzorek (100 V) Interakce elektronů Vzorek musí být velmi tenký (50 nm) Možné skenovat široké spektrum vzorků - jednoduchá příprava Snímání Elektrony musí projít skrze vzorek Potřebná informace je získána v blízkosti povrchu vzorku Vyobrazení Svazek elektronů je zaostřený na stínítko čočkou objektivu a zvětšeny k vytvoření obrazu Obraz je vytvářen v průběhu rastrování (řádkování) povrchu vzorku Srovnání TEM a SEM Elektronová mikroskopie buňky •Skenovací Transmisní C:\Users\Michaela\AppData\Local\Microsoft\Windows\INetCache\Content.Word\7 PCL+S 500.tif C:\Users\Michaela\AppData\Local\Microsoft\Windows\INetCache\Content.Word\122197-MSC-PLLA-41r.png 2 μm 50 μm 1934 - první TEM •1934 první TEM •Ernst Rask -University of Berlin •1938 – první obrázek viru •1986 – Nobelova cena • •Rozlišení 100 nm history-imagemid https://ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-B9780128001462000011-f01-11-9780128001462.jpg © 2013 FEI 2020 – TEM – Titan FEI •Precizně nastavitelné parametry pro specifická vlákna, řízení vakua, napětí • •Zpřesnění manipulace se svazkem elektronů – kolimátory, redukce sférické a chromatické aberace • •Digitální kamery, fotonásobiče • •Rozlišení 0,05 nm • tem-titan.png https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020045/full/liquidcelltem-13-4-2020-image.gif https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020045/full/liquidcelltem-13-4-2020-image2.jpg Animated gif spusť prezentaci „shift+F5“ Obtaining 3D structures at atomic resolution in a liquid. The schematic shows a liquid sample contained between two sheets of graphene. Nanoparticles in the liquid freely rotate while a TEM takes thousands of images of the nanoparticles. The images are then analyzed to determine the location of every atom in each nanoparticle. 3D images of platinum particles between 2-3 nm in diameter shown rotating in liquid under an electron microscope. Each nanoparticle has approximately 600 atoms. White spheres indicate the position of each atom in a nanoparticle. Scale bar 1 nm. https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020045 2020 - TEM detects critical differences in nanoparticles https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020044/full/coronavirus-13-4-2020-image1-lr.jp g Coronavirus particles (black) attempting to enter the cytoplasm of the cell. [Debora F Barreto-Vieira/IOC/Fiocruz] https://cdn.iflscience.com/images/2fcc5156-e421-54fb-b2aa-4d0cfd5b8bbb/content-1586526432-4013-a-61 5-200k-pb.jpg The virus (black blob) as it entering the nucleus membrane. [Debora F Barreto-Vieira/IOC/Fiocruz] TEM and COVID-19 https://gizmodo.uol.com.br/wp-content/blogs.dir/8/files/2020/01/protecao-coronavirus-getty-800x449. jpg 100 nm https://gizmodo.uol.com.br/coronavirus-tem-cura-tudo-o-que-voce-precisa-saber/ https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020044 "To the best of our knowledge, this is the first report from India detecting the SARS-CoV-2 virus using TEM directly in a throat swab specimen confirmed by PCR,” says Basu. “Although TEM imaging was limited by particle load in the specimen, we could still detect morphologically identifiable intact particles in stored clinical sample without initial fixation." “This finding emphasizes the merit of the use of conventional negative-stained TEM imaging in clinical samples along with other diagnostic tests in parallel,” he adds. https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020038/full/CoronavirusTEM-31-3-2020image1.jpg https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020038 TEM jako diagnostický nástroj Chinese team reveals appearance of inactivated Covid-19-cnTechPost A Chinese research team obtained biological samples from clinical Coronavirus Disease 2019 (Covid-19) pneumonia cases. For the first time, the true morphology of Covid-19 after inactivation was observed using a cryo-electron microscope, providing an important ultra-microscopic imaging basis for the identification, identification and clinical research of Covid-19. Molecular structure of the 2019-nCoV spike protein https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00020009 Metody přípravy biologického materiálu pro TEM •Standardní metody: •ultratenké řezy •metoda negativního kontrastování •imunoznačení • •freeze fracture and etching (mrazové lámání a leptání) •stínění kovem • •Specializované metody: •kryo- transmisní elektronová mikroskopie • Příprava vzorků pro TEM •Vzorek musí být velmi tenký a pro elektrony prostupný •Nejčastěji se připravuje zaléváním do pryskyřice a poté se upravuje krájením řezů o požadované tloušťce, které se „dobarvují“ těžkými kovy, či protilátkami s navázanými nanočásticemi kovu (Au, Ag) • • Fixace - aldehydy (glutaraldehyd, formaldehyd) - cílem je stabilizovat preparát co nejblíže nativnímu stavu Postfixace - OsO4 – šetrně a jemně gelifikuje intracytoplazmatické proteiny, dobře zachovává strukturu biologických membrán a nadto stabilizuje a kontrastuje lipidy - vysoce toxická látka Odvodnění - vzestupná řada alkoholu, aceton Prosycení a zalévání - rostoucí koncentrací pryskyřice. Dle typu tkáně a použité techniky snímání. •na epoxidové bázi – e.g. Durcupan •na akrylátové bázi – e.g. LR White •na polyesterové bázi - Vestopal W Nejčastěji LRW. Polymerace – teplem nebo ozářením UV světlem vzorek zalitý v pryskyřici Příprava vzorků pro TEM Ultratenké řezy Krájení – vzorku v pryskyřici ultramikrotomem na hladinu dH2O. Přenesení – Na síťky potažené formvarovou blánou se naberou z hladiny ultratenké řezy. Výsledek obrázku pro sample preparation tem Výsledek obrázku pro contrasting of sample on membrane tem (Pozitivní) Kontrastování ultratenkých řezů Ultratenké řezy mají minimální kontrast. Ten zvýšíme navázáním těžkých kovů na buněčné struktury. Provádí se nakápnutím roztoku na mřížku se vzorkem. Protože těžké kovy blokují a rozptylují tok primárních elektronů, místa, kde se navázaly jsou tmavá. Nosné mřížky (síťky) Příprava vzorků pro TEM Ultratenké řezy Ultramicrotome Příprava vzorků pro TEM Mřížka Držák mřížky-vzorku Držák mřížky-vzorku Ultratenké řezy pdf https://www.youtube.com/watch?v=Ad5VGbA-_vk Adelaide University Příprava vzorků pro TEM – video Ultratenké řezy https://www.youtube.com/watch?v=6CY4Zcw8qIY https://youtu.be/6CY4Zcw8qIY?t=135 Oxid osmičelý – lipidy (membrány) Ferokyanid Octan uranylu - nukleové kyseliny a proteiny Citrát olova – (precipitát, zrna) – membrány, nukleové kyseliny, glykogen Kontrastovací látky Výsledek obrázku pro osmium oxide electron microscopy Výsledek obrázku pro uranyl acetate electron microscopy Bez s kontrastováním Ultratenké řezy https://webcdn.leica-microsystems.com/fileadmin/_migrated/pics/Pag521Fig1.jpg https://www.leica-microsystems.com/science-lab/brief-introduction-to-contrasting-for-em-sample-prep aration/ •lokalizace antigenu na vzorku probíhá navázáním specifické primární protilátky a následně označený pomocí sekundární protilátky značené těžkým kovem (ferritin, částice koloidního zlata, stříbra. aj.) • •Značeny jsou ultratenké řezy – vzorky fixovány, odvodněny a zality do hydrofilních pryskyřic • •velikost částic 3-40 nm Imunoznačení pro TEM Primární protilátka anti-aktin produkovaná v myši Anti-myší sekundární protilátka značená částicemi koloidního zlata Imunoznačení v EM Vzorek tkáně - Lidská buňka Aktin Jádro Imunocytochemie Imunoznačení zlatem - lokalizace specifického antigenu pomocí částic koloidního zlata (5-40 nm) navázaných na sekundární protilátku aurion Immunolabeling of the periplasmic space in ultrathin cryosections of Escherichia coli with a protein A gold conjugate. Courtesy M. de Jong Immunogold staining of sample of Rotavirus-like particles in transduced cellsRVLPs using a polyclonal anti-rotavirus serum and a secondary antibody coupled to 12 nm colloidal gold. Scale bar = 100 nm. http://www.microscopy.cz/html/images/2141_2_3546c39c_fig3.jpg http://www.microscopy.cz/html/2141.html https://www.emsdiasum.com/microscopy/products/immunogold/immunogold.aspx Negativní kontrastování •Je určena pro pozorování vzorků jejichž velikost je hluboko pod tloušťkou ultratenkých řezů, např. různých biologických makromolekul (proteinů, lipoproteinů, polysacharidů, nukleoproteinových komplexů), isolovaných buněčných organel (mitochondrie, membránové systémy) a celých buněk (bakterie, viry). • •Smíchání vzorku vroztoku s fixačním roztokem –kyselina wolframová –uranyl acetát, etc. •Nanesení na mřížku, zaschnutí, pozorování •Rychlá metoda • •Kontrastovací látka obalí a zčásti penetruje vzorek. Díky rozdílu hustoty ve vrstvě kontrastovací látky na vzorku a v okolí se pak částice jeví v některých oblastech transparentní. Okolo částic je charakteristické tmavé ohraničení způsobené vzlínáním kontrastovací látky Související obrázek Freeze fracturing and etching Mrazové lámání a leptání •Fixace, nahrazení části vody v preparátu kryoprotektivem (PEG) •Zmrazení v tekutém freonu (-160°C), přenesení do tekutého dusíku (-196°C) •Lom vzorku (aparatura pro mrazové lámání, vakuum, -190°C) •Odsublimování části vody z lomné plochy při (etching, -100°C) •Pokovení lomné plochy: Pt (pod úhlem 45°) a C (pod úhlem 90°) - vytvoření tzv. uhlíkové repliky (20 nm) •Čištění replik - odstranění veškerého biologického materiálu kyselinami •Přenos řezů na nosné síťky s formvarovou blánou, pozorování Metoda pro zobrazování povrchu lomných ploch membránových struktur Výsledek obrázku pro freeze etching http://www.tobiasrose.co.uk/mrbevis/ebpf.html Platinum Carbon Výsledek obrázku pro freeze etching Chlamydomonas (měřítko 1 µm) biomembrana%2Ejpg etching11 Freeze fracturing and etching Mrazové lámání a leptání Kvasinka Saccharomyces cerevisiae Freeze fracturing and etching - výsledný obraz kvas freeze jádro cytoplasma mitochondrie póry v jaderné membráně BF812-141 BF812-03 Leukemická buněčná linie HL-60 Freeze fracturing and etching - výsledný obraz detailního pozorování povrchu jaderné membrány ultarenky rez FE živočišná buňka - freeze-etching živočišná buňka - ultratenký řez Srovnání ultratenkého řezu a repliky z freeze-etching Stínění kovem •Stínování spočívá v pokrývání preparátu tenkou vrstvou kovu. Při pokovování je preparát nakloněný, což zajistí zvýraznění jemných fibrilárních struktur a detailů malých makromolekul, např. kolagenu, DNA, RNA, ribozomů nebo buněčné stěny. • •pokovování se provádí ve vakuu (10-4 Pa) Související obrázek pokovovačka s komorou pro vytvoření podtlaku Stínění kovem - výsledný obraz dna1 1_5B DNA https://c8.alamy.com/comp/HRF8D0/polio-virus-tem-HRF8D0.jpg Polio virus https://www.alamy.com/stock-photo-polio-virus-tem-134945580.html 3D elektronová mikroskopie TEM tomografie Nakláněním (otáčením) vzorku v mikroskopu a následným prosvěcováním eletronovým svazkem, je získána série obrazů, ze kterých je zpětnou projekcí vytvořena 3D morfologie objektu. Technika poskytuje vysoké rozlišení, ale je limitována velikostí analyzovaných objektů. Řádově desítky nm. Proto se využívá pro analýzy struktury molekul, proteinů, krystalů. Zejména pro krystalografii má své výhody vzhledem k tomu, že lze vynechat nezbytný krok krystalizace vzorku. Při využití technik kontrastování biologických vzorků dochází ke vzniku množství artefaktů. Proto se v současnosti technika tomografie využívá nejvíce v souvislosti s Cryo-eletronovou mikroskopií, při které je vzorek pozorován za nízkých teplot (-180oC) bez nutnosti kontrastování. Viz následující přenášky. https://www.researchgate.net/profile/Guoqiang_Bi/publication/230569000/figure/fig3/AS:3008214524764 29@1448732831691/Flowchart-of-electron-tomography-The-specimen-is-tilted-incrementally-along-an-axi s.png https://www.researchgate.net/figure/Flowchart-of-electron-tomography-The-specimen-is-tilted-increme ntally-along-an-axis_fig3_230569000 https://ars.els-cdn.com/content/image/3-s2.0-B9780128005118000058-f05-14-9780128005118.jpg?_ Example of an electron tomography image: synaptic vesicles docking at release sites in the neuromuscular junction. (A) Two-dimensional TEM images used in the ET volume reconstruction. Scale bar, 50 nm. (B) Three-dimensional surface-rendered, docked vesicles, and presynaptic membrane that allow the shape, size, and associations of different components to be examined. 3D elektronová mikroskopie TEM tomografie 3D elektronová mikroskopie TEM tomografie Harlow, M.L., et al. (2001). The architecture of active zone material at the frog’s neuromuscular junction. Nature: Macmillan Publishers Ltd. https://www.youtube.com/watch?v=nvXuq9jRWKE&feature=youtu.be&t=40 Schematic diagram of 3D reconstruction methods. Příprava vzorku je obdobná jako pro transmisní EM, avšak řezy jsou kladeny na fólii jeden za druhým. Z milimetru tkáně je získáno vice než 10 tisíc vzorků. Tyto jsou následně skenovány pomocí SEMu a z obrazů je vytvořena 3D rekonstrukce. 3D elektronová mikroskopie Array tomography https://www.jeol.co.jp/en/applications/detail/1695.html Využití EM •Věda (biologie, chemie – např. ke kvantitativní •prvkové analýze, geologie ...) • •Lékařství (studium bakterií a virů ...) • •Soudní lékařství (forensní EM) • •Metalurgie (studium vlastností materiálů) • •V mikroelektronice (studium čipů, mikroprocesory) • https://docplayer.cz/23452724-M-i-k-r-o-s-k-o-p-i-e.html Nevýhody EM •Drahý a prostorově náročný přístroj • •Pozorování jen ultratenkých řezů (náročné na •přípravu preparátů) • •Umístění preparátu ve vakuu znemožňující •pozorování živých organismů • Příklady využití elektronové mikroskopie v medicíně (užíváno jako doplňková metoda upřesnění diagnózy) •Diagnostika nemocí ledvin – detekce strukturních změn glomerulu, detekce depozit imunokomplexů •Diagnostika svalových onemocnění •Diagnostika poruch metabolismu •Detekce virů Zika Virus TEM of Zika Virus. Virus particles are 40 nm in diameter, with an outer envelope and an inner dense core. Courtesy of Cynthia Goldsmith, CDC. Lupu nephiritis of kidney imaged with TEM Renal biopsy of diseased kidney tissue https://www.thermofisher.com/cz/en/home/electron-microscopy/life-sciences/pathology-research.html Reference •https://is.muni.cz/do/rect/el/estud/lf/js19/mikroskopicky_atlas/web/index.html •http://triton.paru.cas.cz/old-lem/book/index.html •http://www.fei.com/introduction-to-electron-microscopy/ •http://www.nanotechftm.tmf.bg.ac.rs/images/stories/dokumenti/lecture_book_em_school/aleksandra%20k orac.pdf •