C6200-Biochemické metody
10C1_Refraktometrie
Petr Zbořil

Disperzní metody
•Prostředí mění rychlost šíření elektromagnetického záření
•Jde prakticky o zpomalení
•Prostředí izotropní – refraktometrie
•Prostředí anizotropní – polarimetrie (chirální metody vč. absorpčních)

Lom světla
n = cv/c ³ 1
Snellova rovnice

Lom světla
•
•
•
•
•

Lom světla a mezní úhel



Refraktometrie
•Jednoduché – úzký paprsek
•Určení mezního úhlu – klouzavý paprsek, 2 hranoly
•
•
•
•
•
•
•
•AB, ED – matné, AC, BC - leštěné
•

Ponorný refraktometr



Abbého refraktometr
•1.Osvětlovací hranol
•2. Měřicí hranol
•3. Zrcadlo
•4. Soustava hranolů pro
•kompenzaci disperze
•5. Objektiv
•6. Stínítko
•7. Okulár
•8. Paralelní hranol
•9. Čtecí objektiv
•10. Zrcadlo
•11. Stupnice
•12.Kondenzor

Abbého refraktometr



Abbého refraktometr
•
•
•
•
•
•Určení rozhraní – stupnice n
•Ostrost – disperze – mono x polychromatické světlo

Podmínky a parametry
•Vliv T, většinou nepřímá závislost – vliv ρ – temperace
•Vliv tlaku, skupenství
•Vliv λ, monochromatické světlo – Na (589 nm)
•Měrná a molární refrakce RM = r. Mr
•          (n2 – 1).Mr
•    RM  = --------------
•          (n2 + 2).ρ hustota látky
•
•Disperze – rozdíl R pro různé vlnové délky
•

Užití refraktometrie
•Rychlá orientační stanovení koncentrací (sacharidy, etanol), čistoty (ovlivňuje n)
•
•
•
•
•
•
•Sacharosa

Potvrzování struktury – aditivita atomových a vazebných refrakcí
•Příspěvky atomů, skupin a vazeb k molární refrakci
•
•
Atom nebo skupina
Rm (cmW-1)
H (X = 656,3 nm)
D (k = 589,3 nm)
CH2
4,598
4,618
C
2,413
2,418
H
1,092
1,100
dvojná vazba
1,686
1,733
trojná vazba
2,328
2,398
kyslík hydroxylu
1,522
1,525
kyslík etheru
1,639
1,643
kyslík karbonylu
2,189
2,211
Cl
5,933
5,967
Br
8,803
8,865
I
13,757
13,900
N v primárním aminu
2,309
2,322
N v sekundárním amin
2,478
2,502
N v terciárním aminu
2,808
2,840