Struktury buňky
(inkluze a barvení pouzder)
2. cvičení
Cytologie a morfologie bakterií
Fidrich (2020)

Barvení volutinu
1.Kapka vody na podložní sklíčko + kultura
2.Rozetřít po sklíčku a nechat zaschnout na vzduchu
3.Fixace vysušeného preparátu v plamenu
4.Převrstvit Löfflerovou metylenovou modří na 5 min a poté opláchnout destilovanou vodou
5.Na 1-3 s převrstvit 1% H2SO4 a poté smýt destilovanou vodou
6.Pozorovat pomocí imerzního objektivu (100x)

Barvení volutinu
1.Kapka vody na podložní sklíčko + kultura
2.Rozetřít po sklíčku a nechat zaschnout na vzduchu
3.Fixace vysušeného preparátu v plamenu
4.Převrstvit Albertovým roztokem na 5-7 min a poté nechat volně odtéct
5.Na 1-2 min převrstvit Albertovým jódem a poté smýt opatrně destilovanou vodou
6.Pozorovat pomocí imerzního objektivu (100x)

Barvení lipidů (tuku)
1.Na podložní sklíčko přenést do kapky vody malé množství kultury
2.Jemně rozetřít po sklíčku a nechat zaschnout na vzduchu
3.Fixace vysušeného preparátu v plamenu
4.Převrstvit formaldehydem na 5 min poté opláchnout destilovanou vodou (práce v digestoři)
5.Převrstvit metylénovou modří (1:40) na 10 min, poté opláchnout destilovanou vodou
6.Převrstvit roztokem Sudan III., po 10-15 min opláchnout
destilovanou vodou
7.Pozorovat pomocí imerzního objektivu (100x)

Barvení glykogenu
1.Do malé kapky vody rozmíchat malé množství kultury
2.Smíchat s Lugolovým roztokem
3.Přikrýt krycím sklíčkem a pozorovat pomocí objektivu 40x a poté imerzním objektivem 100x

Negativní barvení pouzder
oNigrosin/Kongo červeň (A)
1.Na podložní sklíčko přenést  kulturu do kapky vody
2.Pomocí druhého podložního sklíčka/kličkou rozetřít kapku
3.Nechat zaschnout na vzduchu
4.Převrstvit metylénovou modří na 5 min
5.Barvivo slít a jemně omýt destilovanou vodou
6.Na kraj sklíčka kápnout nigrosin/Kongo červeň a rozetřít tahem druhého podložního sklíčka
•V případé KČ opláchnout opatrně preparát 1% HCl (do změny barviva)
7.Nechat uschnout a pozorovat imerzním objektivem (100x)
oKongo červeň (B)
1.Do kapky Kongo červeně přenést malé množství kultury
2.Pomocí druhého podložního sklíčka rozetřít kapku
3.Opláchnout 1% HCl 1-3 s (změna barvy)
4.Převrstvit metylénovou modří na 5 min
5.Barvivo nechat odtéct a pozorovat imerzním objektivem (100x)
https://youtu.be/7xoizj6iqCI?t=72

Pro barvení pomocí Kongo červeně je možné využít 2 varianty A nebo B.

Negativní barvení pouzder
oBarvení dle Manevala
1.Na podložní sklíčko přenést  kulturu do kapky Kongo červeně
2.Pomocí druhého podložního sklíčka rozetřít kapku
3.Nechat zaschnout na vzduchu
4.Převrstvit Manevalovým roztokem na 5 min
5.Barvivo slít a preparát jemně omýt destilovanou vodou
6.Pozorovat imerzním objektivem (100x)

Obecně u negativního barvení pouzder, kdy se barví okolí buněk a buňky samotné. Pouzdro je
nenabarvené a môže tvořit u bakterie Azotobacter podobu připomínající soví oči.

Co pozorovat?
o Barvení volutinu (1)
•Kvasinka (MEA, YM), Corynebacteruium
o Barvení lipidů (1)
•Kvasinka (MEA, YM)
o Barvení glykogenu (1)
•Kvasinka (MEA, YM-1g/l pept.)
oNegativní barvení (1)
•Azotobacter/Leuconostoc
koky:
„Azotobacter vinelandii“  Leuconostoc
Eukaryota:
Saccharomyces cerevisiae
Yarrowia lipolytica
Hanseniaspora uvarum
tyčinky:
Corynebacterium glutamicum

MEA – malt extract agar
YM – yeast medium
YM-1g/l pept. – obsah peptonů je oproti původnímu médiu znížen z 5g/l na 1g/l