—Stopa -biologický materiál (co vyprodukovala příroda) na místě činu, který má souvislost s TČ – stane se součástí zkoumání -v podstatě cokoliv (KSSMTK x směs) -pro genetiku – nutnost obsahu DNA — —Srovnávací vzorek -biologický materiál odebraný osobě známé totožnosti x mrtvola neznáme totožnosti je stopa -poškozený -podezřelý -domácí osoba -eliminační vzorek — BIOLOGICKÝ MATERIÁL vše, co bylo či je součástí nebo produktem živého organismu krev sperma sliznice Lidské / zvířecí chlupy části rostlin BIOLOGICKÁ STOPA biologický materiál zajištěný v souvislosti s kriminalisticky relevantní událostí – například na místě činu stěr moči sliny na nedopalku —nutno zjistit původ materiálu —orientační testy a specifické testy — —ORIENTAČNÍ: —Orientační zkouška, která vyšla pozitivně, udává, že se může jednat o daný materiál, ale taky nemusí. Tyto zkoušky jsou velmi rychlé a levné. Jsou založeny na detekci přítomnosti určitých chemických látek nebo to jsou zkoušky s fyzikální podstatou, jako je užití světla. U orientačních zkoušek se vyskytují falešně negativní výsledky s nízkou frekvencí ovšem s vyšší frekvencí falešně pozitivní výsledky. — —SPECIFICKÉ: —Pozitivní výsledek specifické zkoušky indikuje, že se téměř určitě jedná o daný materiál. Specifické zkoušky poskytují vysokou pravděpodobnost, že se jedná o daný materiál. Existují i výjimky, kdy se může jednat o falešně pozitivní výsledek, ovšem tato pravděpodobnost je často zanedbatelná. Tyto zkoušky jsou založeny na detekci přítomnosti specifických bílkovin, hormonů atd. — —Určení druhu biologického materiálu se provádí u stop, kdy je tohoto materiálu dostatek a neohrozí se případné stanovení genetického profilu osoby, které by po odebrání určitého množství materiálu už nebylo možné stanovit v potřebné kvalitě. — - výsledek = „nejspíš se nejedná o krev“ C T C T + výsledek = „pravděpodobně se jedná o krev“ - výsledek = „s jistotou se nejedná o sperma“ + výsledek = „s jistotou se jedná o sperma“ SPECIFICKÁ ZKOUŠKA ORIENTAČNÍ ZKOUŠKA pozitivní výsledek indikuje, že by se mohlo jednat o daný biologický materiál —neprůhledná tekutina červené až červenohnědé barvy — —další typy lidské krve, které lze odlišit: —- pupečníková krev — krev nenarozeného dítěte, která obsahuje velké množství krvetvorných kmenových buněk, obdobně jako kostní dřeň —- menstruační krev — krev obsahující tkáň a výměšky děložní sliznice —Krevní kapky —Vznikají volným dopadem krve z krvácejícího místa na podložku, přičemž jejich vzhled může být odlišný podle úhlu dopadu kapky. Tato krevní stopa svědčí zpravidla o menším poranění člověka či zvířete. Typicky jsou kapky kruhovitého charakteru, ale může se jednat i o elipsoidní útvary. Podle struktury okraje lze odhadnout výšku, z které kapka dopadla. Jedná-li se o hladký okraj, kapka dopadla z malé výšky. Pokud je okraj vlnitý, výška byla vyšší. — —Krevní stříkance —Mohou vznikat při prudkém vystřikování krve z poraněného místa člověka nebo zvířete, jako je tepenné krvácení či krvácení z velkých žil. Dalším možným vznikem těchto stop mohou být opakované údery do krvácejícího poranění, zpravidla v případě obětí trestných činů nebo výjimečněji dopad různých objektů do kaluže tekuté krve. Zdrojem tohoto druhu stop mohou být i prudké pohyby končetin poraněného organismu v důsledku působení odstředivé síly. — — —Krevní stružky —Vznikají volným vytékáním krve z krvácející rány organismu, který je buď poraněný, nebo v krátkém časovém intervalu po smrti. Směr krevního toku je udáván zpravidla gravitací. —Krevní kaluže —Tyto krevní stopy vznikají především na konci krevních stružek, kde se krev hromadí. Nejen krevní stružky, ale hlavně krevní kaluže svědčí o vážném poranění, tedy o větší ztrátě krve jedince. Při ohledání bývá krev v krevních kalužích často tekutého charakteru a jen zřídka se v kriminalistické praxi nalézají krevní kaluže bez poraněného či usmrceného člověka nebo zvířete. —Krevní šmouhy —Mohou vznikat při styku zakrváceného objektu s jiným objektem, který potřísněn krví většinou není. Klasickým příkladem je, že si člověk se zakrvácenýma rukama otře krev do oblečení, dotkne se zdi, dveřní kliky, nábytku atd. Krevní šmouhy jsou velmi často kombinovány s dalšími druhy kriminalistických stop, jako jsou třeba daktyloskopické. Tyto stopy samy nevypovídají o vážnosti zranění, ale mohou být často takticky významné. —Krevní stopy vzniklé jako stopy po odstranění krve —Tento typ stopy je nalézán na objektech, které byly nositeli krevních stop, ovšem došlo k jejich vyčištění, vyprání či umytí. Na takto upravených objektech jsou nalézány pouze zbytky krevního materiálu, které jsou ještě poznamenány užitím čistících nebo pracích prostředků a je nutno k nim tak přistupovat. Typickými příklady míst se zbytky krevního materiálu jsou švy a záhyby textilního materiálu, škvíry jak v podlahových krytinách, tak nábytku, zbraní apod.. lLuminol – orientační test -C8H7N3O2 (IUPAC: 5-Amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione; o-Aminophthaloyl hydrazide, o-Aminophthalyl hydrazide, 3-Aminophthalhydrazide 3-Aminophthalic hydrazide) -všestranná chemikálie známá svojí chemoluminiscencí při smíchání s vhodným oxidačním činidlem v podobě modrého záření v tmavé místnosti -bílá až světle žlutá krystalická látka rozpustná ve většině organických rozpouštědlech, ale nerozpustná ve vodě -složení reakční směsi: 3-amino-ftalhydrazid (luminol), Na2CO3, destil. H2O, perborát sodný (podle Grodského z roku 1951) nebo 3-amino-ftalhydrazid (luminol), NaOH (nebo KOH), H2O2 (podle Webera z roku 1966) -v buněčné biologii využíván pro detekci mědi, železa a kyanidů -pomocí reakce luminolu s hemoglobinovým železem je možné detekovat i stopové množství krve (ředění až 107) Þ modré záření trvající cca 30 s -může ovlivnit množství a kvalitu DNA ve stopě — -BlueStar® Forensic (BlueStar) – orientační test -test na bázi luminolu -detekce krevních stop pouhým okem neviditelné (vyprané, vyčištěné skvrny apod.) -schopnost detekce při ředění až 1:10000 -intenzivnější a delší luminiscence -pro detekci není třeba úplná tma -možná opakovaná aplikace -falešně pozitivní reakce: brambory, rajčata, červená cibule, fazole, křen, kyselina askorbová, 5% bělidlo, CuSO4, Fe2(SO4)3, sloučeniny chlóru a niklu — -Hemascein® (Abacus Diagnostics) – orientační test -slouží k odhalení latentních krevních stop na bázi redoxní reakce -neobsahuje luminol -zkouška na bázi fluoresceinu -nevyžaduje úplnou tmu -fluorescence až 10 minut -bez interakce s DNA -zdraví nezávadný -falešně pozitivní reakce: brambory, krev jiného živočišného druhu, některé oleje — lvětšina orientačních zkoušek se zaměřuje na detekci přítomnosti hemoglobinu lKastle – Meyerův test – orientační test -poprvé popsán roku 1930 -detekce hemoglobinu fenolftaleinem -zkouška založená na peroxidázové aktivitě hemoglobinu katalyzovat oxidaci fenolftaleinu Þ světle růžové zabarvení -reakce hemoglobinu a peroxidu vodíku, při kterém se spotřebovávají elektrony; fenolftalein se v této reakci chová jako dárce elektronů, dochází k redukci, mění tak svoji klasickou formu na fenolftalin a mění své prostředí na alkalické lZkouška peroxidem vodíků (H2O2) – orientační test -explozivní reakce - krev slouží jako katalyzátor při štěpení H2O2 na vodu a kyslík Þ typické „zašumění“ vzorku -ničí DNA !!! lAdlerův test - orientační test -krevní test založený na reakci benzidinu, Na2O2 a ledové kyseliny octové Þ modro zelené zbarvení -vysoká citlivost (možná detekce vzorku při ředění 1:500000) — -Bertrandova zkouška – specifický test -Hb za přítomnosti MgCl2 tvoří s kys. octovou při tepolotě 120 ºC červenohnědě krystaly acetchlorheminu kosodélníkového či kosočtverečného tvaru - -Teichmannova zkouška – specifický test -důkaz krve pomocí heminových krystalů -objev roku 1853 – L. Teichmann -zahřátí směsi vzorku krve, chloridu sodného a kyseliny octové Þ hnědé kosodélníkové krystalky, někdy ve formaci křížů nebo hvězdic -nemusí se podařit nalézt krystalky u vzorku vystaveného teplotě kolem 140 ºC — -Takayamova zkouška – specifický test -specifická hemochromogenová zkouška pro určení krve ve skvrně -hemochgromogen = rozpadový derivát Hb s denaturovanou globinovou částí a dvojmocným železem -vhodná k průkazu krevních skvrn starých, poškozených hnilobou, teplem, kyselinami nebo alkáliemi -objev roku 1912 – Masao Takayama -krevní skvrna na podložním sklíčku + reagens (glukóza, NaOH, pyridin, dest. H2O) + krycí sklíčko + zahřátí nad plamenem -Fe z hemoglobinu reaguje s pyridinem za vzniku oranžovo – červených krystalků -vyžaduje velké množství materiálu — -SERATEC® HemDirect test (SERATEC) – specifický test -test založený na imunochromatografii -detekce lidského hemoglobinu na základě specifické reakce antigen – protilátka -test původně vyvinutý pro účely detekce krve ve stolici Þ časná detekce rakoviny tlustého střeva -falešně pozitivní reakce: krev primátů a fretky — Obsah obrázku elektronika Popis byl vytvořen automaticky Hexagon OBTI - -využíván k detekci lidské krve - -detekce lidského hemoglonbinu (hHb) – monoklonální protilátka anti-human Hb - -reaguje při naředění 1 : 2,000,000 (cca 250 červených krvinek - 0.05 µg/ml hemoglobinu) - -falešně pozitivní reakce: primáti (gorilla) a fretkovití (lasička, jezevec) - -nereaguje s kráva, prase, ovce, koza, kůň, králík, kuře, kachna, husa, morče, jelen, kočka, pes - - -HemaTrace® (Abacus Diagnostics) – specifický test -detekční limit pro hemoglobin: 0,07 μg/ml -specifita pro lidskou krev, krev vyšších primátů a krev fretky - -RSID™ - Blood (Rapid Stain Identification) (Independent Forensics) – specifický test -využití dvou monoklonálních protilátek proti specifickému proteinu – glykoforin A – specifický membránový protein erytrocytů (místo protilátek proti hemoglobinu) Þ vyhnutí se křížové reakci s krví fretky, skunka, vyšších primátů apod. -schopnost detekce < 1 μl krve — Extract (μl): 0 0.2 1 5 20 100 Blood (μl): 0 0.01 0.05 0.25 1.0 500 —PMB test (SERATEC) —kombinace detekce lidského hemoglobinu a D-dimeru —D-dimer je fibrin degradující produkt přítomný v krvi, resp. krevní sraženině, a je degradován fibrinolýzou —obsahuje dva zesítěné D fragmenty fibrinového proteinu, ze kterého je odvozen název D-dimer (menstruace je spojena s aktivací koagulačních a fibrinolytických drah) —rozvoj akutního a/nebo chronického nadměrného srážení krve (trombotickou příhodou) jako hluboká žilní trombóza (HŽT), plicní embolie (PE), nebo diseminovaná intravaskulární koagulace (DIC) —citlivost: hemoglobin: 20 ng/mL; D-dimer: 400 ng/mL – tři proužky —falešně pozitivní: primáti a fretky —falešně negativní v pozdější fázi menstruace —Amyláza – enzym štěpící škrob na jednodušší cukry —- první enzym, který byl nalezen a izolován (1833) -α-amyláza produkovaná slinnými žlázami = ptyalin – štěpí α-glykosidickou vazbu obsaženou v polysacharidech za vzniku menších jednotek – dextrinů —Lugolův roztok (Lugolovo činidlo) - roztok elementárního jodu a jodidu —draselného ve vodě — - používaný pro důkaz škrobu (jod se váže do molekuly škrobu) Þ tmavě modré zbarvení — - v přítomnosti slin (obsahují α-amylázy), dojde ke štěpení α-glykosidické vazby, a tím k degradaci škrobu na menší jednotky Þ jod se nemá kam vázat Þ žluto – hnědé zbarvení — Roztok škrobu s Lugolovým činidlem bez slin Roztok škrobu s Lugolovým činidlem se slinami —AmylasePaper (SERATEC) —- k detekci skvrn slin, do 10 min. —- citlivost: pod 125 mIU/mL —https://www.youtube.com/watch?v=JBTOeRjK0TU —https://youtu.be/JBTOeRjK0TU — —SERATEC® AmylaseTest -k detekci α-amylázy -citlivost: ředění 1:1000 -do 10 min. -není falešně pozitivní s tělními tekutinami a se slinami domácích a užitkových zvířat —https://youtu.be/Iuk3eayaPEI - lRSID™ - Saliva (Rapid Stain Identification) (Independent Forensics) – specifický test -specifický test pro detekci lidské slinné α-amylázy -metoda založená na imunochromatografii se dvěma monoklonálními protilátkami -test specifický pro lidský slinný (AmyA) antigen Þ bez zkřížené reakce s krví, spermatem, močí, vaginálním sekretem, menstruační krví a zvířecími slinami -detekční limit: < 1 μl — Extract (μl): 0 1 5 10 20 Saliva (μl): 0 0.05 0.25 0.5 1.0 -Fast Blue B – sůl C14H12N4O2Cl2 · ZnCl2 - orientační test -(průkaz kyselých fosfatáz (roztok připraven dle protokolu v laboratoři)) -detekce kyselé fosfatázy – glykoprotein produkovaný mužskou prostatou Þ transport do seminální tekutiny – koncentrace až 400x vyšší než v jiných tělních tekutinách -PAP (prostatic acid phosphatase) – 1. celosvětově využívaný tumorový marker -pomocí filtračního papíru přenesení zvlhčené skvrny - zkoumané místo nejprve vizuálně prohlédněte - textilie vykazují na podezřelých místech tužší krepovitou strukturu, pod UV světlem mají stopy modravou, bílou nebo žlutavou fluorescenci -k místu se přidá detekční činidlo přidání několik kapek monohydrátu α-naftylfosfátu sodného a roztoku Fast Blue B ke vzorku Þ purpurové zabarvení indikující přítomnost PAP, nutno provést zkoušku na ověřeném materiálu, moč, sekret, sliny reakci neovlivňují - — —Phosphatesmo KM -reaguje s kyselou fosfatázou, kterou obsahuje sperma -zkoumané místo nejprve vizuálně prohlédněte - textilie vykazují na podezřelých místech tužší krepovitou strukturu, pod UV světlem mají stopy modravou, bílou nebo žlutavou fluorescenci -místo navlhčit, přiložit testovací plochou po dobu cca 15 s a je-li přítomno sperma, po několika sekundách se objeví výrazné fialové skvrny - -SERATEC® PSA Semiquant test (SERATEC) – specifický test -využití monoklonální protilátky proti specifickému proteinu – PSA (prostatický specifický antigen) = p30 = γ-seminoprotein – glykoprotein produkovaný prostatou a sekretovaný do ejakulátu -umožnění detekce spermatu i u jedinců s azoospermií nebo po vazektomii -metoda založená na imunochromatografii -původně vytvořený pro detekci rakoviny prostaty — -ABAcard® p30 test (Abacus Diagnostics) – specifický test -využití monoklonální protilátky proti specifickému proteinu – PSA (prostatický specifický antigen) = p30 = γ-seminoprotein – glykoprotein produkovaný prostatou a sekretovaný do ejakulátu -umožnění detekce spermatu i u jedinců s azoospermií nebo po vazektomii -metoda založená na imunochromatografii — -RSID™ - Semen (Rapid Stain Identification) (Independent Forensics) – specifický test -využití dvou monoklonálních protilátek proti specifickému proteinu – semenogelin – hlavní složka lidské seminální tekutiny Þ vyhnutí se křížové reakci se spermatem kozla, berana, prasete, býka, psa, koně, myši, kocoura -metoda založená na imunochromatografii -Þ bez zkřížené reakce s lidskou krví, slinami, močí -detekční limit: < 1 μl lidského spermatu — Extract (μl): 0 1 5 25 100 Semen (μl): 0 0.05 0.25 1.25 5.0 —specifický důkaz přítomnosti spermatu, jeden z nejcitlivějších způsobů, mikroskopicky histologické barvení —barvící roztok: krystalvioleť, erytrosin se čpavkem, eosin s roztokem azuru —skarifikát podloží kalhotek, či jiného místa s výskytem —pozitivní nález jedné celé spermie — -SPERM HY-LITER™ (Independent Forensics) – specifický test -využití derivované monoklonální myší protilátky proti spermatickým hlavičkám -detekce lidských spermií z míst sexuálních útoků s využitím fluorescenčního mikroskopu -možné detekovat jedinou spermii -Þ bez zkřížené reakce s epiteliálními buňkami, krvinkami a spermatem zvířat — -RSID™ - Urine (Rapid Stain Identification) (Independent Forensics) – specifický test -využití dvou polyklonálních králičích specifických protilátek proti THP proteinu (Tamm - Horsfall protein) – nejhojnější protein v lidské moči Þ vyhnutí se křížové reakci s lidskými slinami, spermatem, krví, vaginální tekutinou nebo menstruační krví; močí želvy, gorily, koně, kočky -reakce s močí psa !!! -metoda založená na imunochromatografii -detekční limit: < 10 μl lidské moči — -Paul Uhlenhuth (1870-1957) -průkaz lidské krve na základě precipitační zkoušky umožňující odlišit lidskou krev od krve jiného živočišného druhu – kontaktní metoda (výstup do 10 min) -předpoklad: krev různých živočišných druhů obsahuje unikátní proteiny; s použitím příslušných protilátek je možné krev jednotlivých druhů odlišit - -Imunoprecipitace (Ouchterlony) - specifický průkaz lidské krve volnou difuzí na gelu — —Průkaz lidského původu lze provést samostatně imunologickými metodami (reakcí lidské bílkoviny se specifickou protilátkou), častěji ale průkaz lidského původu vyplyne „samovolně, jako vedlejší produkt“ z výsledku genetického zkoumání. —Většina forenzně genetických testů užívaných k analýzám lidského biologického materiálu totiž poskytuje standardní pozitivní výsledek právě jen a pouze u lidského materiálu – říkáme, že tyto testy jsou druhově specifické. —Poskytne-li analýza stopy pozitivní výsledek, lze zpětně konstatovat, že stopa obsahovala s jistotou lidský biologický materiál. Z tohoto důvodu se od imunologického průkazu lidské bílkoviny většinou upouští, a to zejména u stop s předpokládaným malým či velmi malým množstvím využitelného biologického materiálu. — — BUKÁLNÍ STĚR PERIFERNÍ KREV dle stavu těla, tj. pokročilosti degradace: SVALOVÁ TKÁŇ KOST, ZUB MRTVOLY EMBRYA, PLODY dle situace: POTRATOVÝ MATERIÁL CHORIOVÉ KLKY PLODOVÁ VODA PUPEČNÍKOVÁ KREV —Podle vztahu jejich zůstavitele k objasňované události ostopy pocházející z organizmu pachatele o stopy pocházející z organizmu oběti o stopy pocházející z organizmu jiné (nezúčastněné) osoby o směsné stopy – pocházející z organizmů nejméně dvou osob — —Podle místa nálezu —- na místě činu —- na předmětech a nástrojích, kterými mohl být spáchán trestný čin —- na oděvních součástkách a těle pachatele —- na oděvních součástkách a těle oběti —- na vozidlech —- na dalších předmětech a místech (se spácháním trestného činu nemusí souviset ) — —Stopy viditelné okem – drobné biologické stopy — - krevní kapky, otěry — - zaschlý nosní sekret — - vlasy, stopy slin na skleničkách atd. — —Stopy okem neviditelné – odhalitelné s použitím speciálních pomůcek či postupů (orientační či specifické zkoušky, monochromatické forenzní světelné zdroje – forenzní „baterky“) — —Stopy latentní – nemožnost detekce ani okem, ani screeningovými testy (Diamond™Nucleic Acid) — - zajišťují se „naslepo“ — - odebírány v místech, kde výskyt — biologického materiálu předpokládáme — - nástroje, oblečení, předměty — —zdroj DNA- celý povrch těla – epiteliální buňky, fragmenty buněk, volná DNA —přenos/transfer primární, sekundární a terciární —množství DNA: vnější a vnitřní faktory — - vnitřní: věk a pohlaví jedince, onemocnění pokožky, — hygienické návyky, „trusič“ x „netrusič“ — - vnější: vlhkost, UV záření, povrch (poréznost, — mikroorganismy) —- intenzita otlaku, způsob zajištění ldetekce založena především na morfologickém porovnání na dvou úrovních: —1) odlišení lidského trichologického materiálu od materiálu jiného živočišného druhu —2) odlišení: vlasy – kožní ochlupení – pubické ochlupení – axilární ochlupení -manipulace s TM - speciální entomologiká pinzeta anagenní katagenní telogenní (růstová) fáze (přechodná) fáze (klidová) fáze kutikula kůra dřeň —detekujeme: délku, šířku, tvar (rovné, mírně zvlněné, zvlněné, vlnité, kudrnaté, fil fil), barva (artificiální, depigmentovaná, světle – tmavě plavá, světle – středně –tmavě hnědá, černohnědá), pigment (difuzní, malé – střední – velké shluky), dřeň (chybí, souvislá, přerušovaná, ostůvkovitá) —poškození: fyzikálně-chemické (dle destrukce stvolu), biologické faktory, genetické (alopecie a hypertrichózy, syndromy) — — C:\Users\hs312876\Desktop\Bio + tricho\Trichos\Trichos II\right\defect\trichorrhexis2.jpg Trichorrhexis nodosa Trichoptilosis Trichonodosis střelná poškození poškození způsobené skleněnými střepy C:\Users\hs312876\Desktop\Bio + tricho\Trichos\Trichos I\right\defect\tlak3.jpg stlačení úderem tupé strany sekery tepelná poškození stlačení pinzetou poškození způsobená konc. NaOH — poškození keratofilními plíšněmi a houbami poškození způsobené různými keratofilními živočichy mykózy C:\Users\hs312876\Desktop\Bio + tricho\Trichos\Trichos II\right\defect\bamboo.jpg Trichorrhexis invaginata C:\Users\hs312876\Desktop\Bio + tricho\Trichos\Trichos II\right\defect\24.jpg Pili bifurcati Monilethrix představuje autosomálně dominantní dědičný defekt vlasového stvolu způsobený mutací genů pro keratin typ II (HB1 a HB6), klinicky se projevující alopeciemi a folikulárními papulemi. C:\Users\hs312876\Desktop\Bio + tricho\Trichos\Trichos II\right\animal\jelen1.jpg C:\Users\hs312876\Desktop\Bio + tricho\Trichos\Trichos II\right\animal\potkan.jpg — určení data/času úmrtí u mrtvoly (post mortem čas) —znalost počastí, teploty, pokryv těla mrtvoly, příčina smrti, lokalita, dostupnost, nadmořská výška, nekrofágní fauna —dle společenstva hmyzu: nekrofágní (čerstvá mrtvola), saprofágní (biochemicky aktivní), dermatofágní (vysychající), keratofágní (dehydratovaných zbytcích) —dle rozkladu mrtvoly: čerstvá, nadmutá, bioch. aktivní, pokročilý rozklad, vysychání a zbytky —odběr reprezentativního vzorku živých i mrtvých larev, kukel a dospělců z těla a lože mrtvoly, dochovat larvy a kukly do stádia dospělce a určit o jaký druh šlo, odpočet délky zpětně do období nakladení vajíček —časově zákonitý sled nekrofágního hmyzu —s délkou doby pobytu mrtvoly v terénu je stejně zákonitě spjato i vývojové stádium každého hmyzu —každý nekrofágní hmyz nalezený na mrtvole má svůj identifikační význam —genetika: nevhodně odebraný vzorek, nepodařilo se určit druh hmyzu — JUDr. Ladislav Dušek: Možnosti využití entomologie v kriminalistice, 1990 —metody extrakce: DEP-25 DNA extraction Kit, Lego DNA kit, buffer a QIAamp DNA Mini kit —co detekuji: mtDNA – cytochrom C podjednotky I a II (COI a COII), polymorfní oblasti mtDNA a rRNA (28S a 16S) —metodika: PCR-RFLP techniky — - pyrosekvenování, RT PCR, microarray, analýza — hetroduplexů (detekce bodových mutací v dsDNA ) —vyhodnocení: daný program s využitím BLASTu a tvorby fylogenetických stromů s využitím statistiky (LR, …), GenBank databáze —databáze vzorků pro daný region —biologie: původ biologického materiálu —pouze a jedině znalec totiž může určit, zda stopa má skutečně povahu biologického materiálu či nikoli — —1) vyhledat —2) zajistit —3) otestovat —4) odebrat na genetiku — —otestovat předpokládané místo pomocí Hemophanu —zajistit část (střihem, stěrem) červenohnědou skvrnou do zkumavky —přidat x ul pufru —počkat cca 15 min. a pak nanést tekutinu na kazetový test —zajistit část (střihem, stěrem) část materiálu s nosičem do zkumavky —přidat x ul pufru —počkat cca 15 min. a pak nanést tekutinu na kazetový test —