Příprava kompetentních
buněk E. coli pro klonování
(Top10F´) a pro expresi
(BL21)
Klonování endolyzinu
Příprava kompetentních
buněk E. coli pro klonování
(DH5a) a S. aureus
(RN4220)
CRISPR/Cas10 inaktivace fága
Příprava kompetentních
buněk E. coli pro klonování
(DH5a) a pro expresi
(BL21)
CRISPR/Cas9 editace E. coli
Příprava kompetentních
buněk E. coli pro klonování
(Top10F´) a pro expresi
(BL21)
Příprava fúzního proteinu
s GFP
Naštěpení
vektoru pET28
Defosforylace
vektoru
Extrakce z gelu
PCR genu pro
endolyzin
Přečištění produktu,
štěpení
Extrakce z gelu
Ligace
Transformace
Izolace rekomb.
vektorů lyzí varem
Transformace do
expresních buněk
PCR nebo štěpení
elektroforéza
Přeočkování
Funkční test PAGE a zymogram
Naštěpení
vektoru pCN51
Purifikace
vektoru kitem
Kontrolní elfo
Spájení oligo
Ligace
Transformace do E. coli
Colony PCR
Elektroporace do S.aureus
RN4220 pSpcI
Elektroforéza
Přeočkování
Funkční test citlivosti buněk
S. aureus k fágům 812 a 812a
Naštěpení vektoru
pDCas9_T7
Defosforylace
vektoru
Extrakce z gelu
Spájení oligo
Ligace
Transformace
Colony PCR
Přeočkování
Elektroforéza
Indukce exprese
Příprava mikroskopického
preparátu a mikroskopie
Naštěpení vektoru
pET28_SH3
Defosforylace
vektoru
Extrakce z gelu
Vyštěpení genu
pro GFP
Přečištění
produktu
Elektroforéza
Ligace
Transformace
Colony PCR
Indukce exprese
Elektroforéza
Přeočkování
Sonikace a purifikace fúzního
proteinu na FPLC
Funkční test citlivosti buněk
S. aureus k endolyzinu
Hodnocení plak
Fluorescenční mikroskopie
buněk s GFP
(po)
(út)
(po)
(út)
(po)
(út)
(po)
Harmonogram cvičení z genového inženýrství – Jaro 2024
Teorie ke čtyřem úlohám bude probírána v úterky pro všechny zapsané studenty společně (3-4× v semestru), v učebně
E25/209. Potřebné pomůcky: notebook. Účast povinná. Praktická část bude probíhat v cca 4 týdnech v semestru/skupina.