CHROMATOGRAFICKÉ METODY III. APLIKAČNÍ ROZSAH CHROMATOGRAFIE Metoda Približný rozsah /Wranalytů Analyzované látky GC 1-400 plyny, látky těkavé a teplotné stabilní, po derivatizaci i netěkavé, po pyrolýze i makromolekulami HPLC 3-106 ionty, látky polární i nepolární, nízkomolekulární i polymery PC, TLC 100-2000 ionty, látky polární i nepolární CE (CZE, CEC, MEKC) 3-106 ionty, látky polární i nepolární, nízkomolekulární i polymery PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE BASIC GAS CHROMATOGRAPHY Second Edition HAROLD M MtNAIR JAMES M.MU.LER ©WILEY PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE ■ Mobilní fáze - plyn ■Stacionárni fáze pevná fáze, kapalina VÝHODY NEVÝHODY > Nižší viskozita mobilní fáze o Použitelné je pro těkavé látky > Rychlejší difúze o Látky musí být termostabilní SCHEMA PLYNOVÉHO CHROMATOGRAFU PLYNOVÝ CHROMATOGRAF ZDROJ NOSNÉHO PLYNU a - compressed gas cylinder b - pressure regulator c - vaive d - filter nosný plyn musí být velmi čistý a suchý Filter- trubice s molekulovým sítem odstraňují H20, uhlovodíky, 02 ELEKTRICKÉ MĚŘENÍ PRŮTOKU MUNI SCI programovatelné elektronické regulační systémy řízení rychlost průtoku nosného plynu (pro získání reprodukovatelných retenčních časů) náplňové kolony: průtok 10-60 ml/min kapilární kolony: 1 - 2 ml/min, velké nároky na stabilitu NOSNÉ PLYNY Plyn Výhody Nevýhody N2 levný, bezpečná práce nízká tepelná vodivost H2 vysoká tepelná vodivost explosivní He inertní drahý Ar inertní drahý PŘÍPRAVA VZORKŮ PRO GC ■ Plyny, kapaliny - přímo ■ Pevné látky - po derivatizaci OBJEMY DÁVKOVANÝCH VZORKŮ Plyny 0.5-5 ml Kapaliny - 0,1 — 10 jul MU N I SCI ZPŮSOBY DÁVKOVANÍ VZORKŮ Flow controller Injector port Termální desorpcí Carrier gas STŘÍKAČKOU „splitless" „split" DÁVKOVACÍ STŘÍKAČKA RYCHLOST DÁVKOVÁNÍ ZPŮSOB DÁVKOVÁNÍ U AUTOMATICKÉ DÁVKOVAČE VENTILEM VENTIL DÁVKOVÁNÍ TERMÁLNÍ DESORPCÍ TERMOSTATOVÁNÍ KOLONY ■ Náplňové - %" OD - ocel, sklo délka 1m ■ Kapilární - 0,1 - 0,5 mm ID - křemen, ocel, sklo délka -10-100 metrů KOLONY porous iayůr ^) conventional opon (capillary) Porous Layer Open Tubů Wall Coated Open Tube KOLONY U Packed with porous layer liquid coated packed cqpillary coated with porous foyer NÁPLŇOVÁ KOLONA KAPILÁRNÍ KOLONA KAPILÁRNÍ KOLONA PEVNÉ STACIONÁRNÍ FÁZE Aktivní uhlí, grafitizované uhlí - dělení plynů a lehkých uhlovodíků Silikagel - dělení anorganických plynů a nízkovroucích kapalin Molekulová Síta (krystalické hlinitokřemičitany) - dělení plynů a lehčích uhlovodíků Porézní polymery (vinylbenzenové kopolymery) - dělení nízkomolekulárních uhlovodíků, anorganických plynů, alkoholů, esterů a ketonů KAPALNÉ STACIONÁRNÍ FÁZE Carbowaxy (polyethylenglykoly) Ucony (polypropylenglykoly) - polární stacionární fáze, s rostoucí Mr klesá polarita Polyestery (např. polyethylenglykoladipáty) - polární stacionární fáze Silikonové stacionární fáze (polysiloxany) - často používané, široký rozsah polarity ELUCE Gradientova - zvyšování teploty - 400 °C ELUCE fc) lb) (a) a - initial temperature and time b - ramp (gC/min) c - final hold time and temperature DETEKTORY Destruktivní x Nedestruktivní Univerzální x Selektivní MUNI SCI DETEKTORY Tepelně-vodivostní Tepelná vodivost Plamenově-ionizační Ionizace (uhlovodíkv) Dusíko-fosforový N,P - určité formy Elektronového záchytu Elektronegativní struktury Atomově-emisní Emisní záření Plamenově-fotometrický P, S - určité formy Fotoionizační Absorbce UV Chemiluminiscenční Excitace (03, F2) FTIR IČ + Fourierova transformace Hmotnostní Ionizace DETEKTORY Citlivost a pracovní rozsah GC detektorů i 10*Bg ALD NPD (N) N P D (P) FPD (S) rPD (P) FTIH MS