Přirodovědecká fakulta Masarykovy univerzity, 2024 Kuře jako experimentální model - II 2 Gallus gallus f. domestica – kuřecí embryo Kuře jako experimentální model II 3 Inkubace kuřecích embryí ̶ Integra Žabčice ̶ Oplozená vejce - lednice ̶ Vývoj embrya v oplodněném vejci začíná vložením vajec do inkubátoru (37,8 °C, konstantní vlhkost) ̶ Vejce musí být položena na stranu Kuře jako experimentální model II 4 Manipulace s kuřecími embryi ̶ Vejce musí být položeno na stranu (A) ̶ Po 1,5 dni (cca 36 hodinách = HH 10) odsáváme bílek (embryo klesne) (B), vystřihneme otvor do skořápky (C), který následně přelepíme a vejce vracíme zpět do inkubátoru ̶ Po cílené manipulaci (injikaci, implantaci, transplantaci..) přelepíme otvor a inkubujeme do odběru (D) Kuře jako experimentální model II 5 Vyjmutí embrya z vajíčka ̶ Nejdříve je nutné přerušit cévy a závěsy, posléze embryo vytáhnout pomocí pinzet (když to nejde, výborně poslouží obyčejná plastová lžička) ̶ Vyjmutí embrya slouží k: • Použití embryonálních tkání ke kultivaci (tkání, nebo vytvoření primární buněčné linie) • Při ukončení experimentu je nutné embryo vyjmout a dále zpracovat ovlivněné tkáně (histologie, izolace RNA pro stanovení exprese..) Kuře jako experimentální model II 6 Mikroinjektáž Kuře jako experimentální model II 7 Chorioallantoic membrane (CAM) assay ̶ CAM: allantois a chorion srůstají 6.-7. ED ̶ Funkce CAM: výměna plynů a příjem vápníku z porézní skořápky, exkrece sodíku a chloridů z allant.vaku, rezervoár odpadních produktů Ribatti 2022 Kweon-Ho Nam et al., 2015 Kuře jako experimentální model II 8 ̶ Murphy, 1913 – inokulace „Jensen rat sarcoma“ na CAM kuřecího embrya ̶ Před E18 není imunitní systém kuřat plně vyvinutý - imunodeficientní prostředí ̶ Studium angiogeneze, růstu a invazivity nádorových buněk a metastazování ̶ Hodnocení „distribuce“ léků a terapeutických látek Kuře jako experimentální model II Chorioallantoic membrane (CAM) assay 9 Kuře jako experimentální model II Liu et al., 2013 Matsumoto et al., 2018 Chorioallantoic membrane (CAM) assay 10 ̶ Biomateriál namočte ve sterilním PBS (pro lepší viditelnost přibarvit trypanovou modří), umístěte na CAM Chorioallantoic membrane (CAM) assay Kuře jako experimentální model II