Sledované parametry mikrobiální ekotoxikologie a působení toxických látek na ně













                                   Odběry pro mikrobiální analýzy



















                       Vizualizace mikroorganismů pomocí fluorescenčních prób



•       fluorescenčně značená biomolekula (protein, NA, polysacharid či lipid) se váže selektivně na
antigen, sacharid, sekvenci NA a označí tak tento cíl



•       pro půdní vzorky intenzivně užívané od r.1970



•       známé množství homogenizovaného vzorku je umístěno do mikroskopovaného prostoru a obarveno
fluorescenčním barvivem



•       lze stanovit délky buněk i jejich objemy (biovolume)



•       lze stanovit % podíl buněk vykazujících invaginaci „Frequency of Dividing Cells" (FDC index)
- in situ stanovený index indikující růstovou rychlost (Bloem, 1992)



•       metabolicky aktivní hyfy hub mohou být stanoveny fluorescein diacetátem (FDA), který se
stává fluorescentním až po enzymatické hydrolýze





                              Antigenní techniky – specifická detekce

1) využití polyklonálních protilátek (vznikají např při imunizaci králíků) - obsahují řadu
protilátek; reagují s necílovými mikroorganismy

2) využití monoklonálních protilátek



a) aglutinační techniky

•       mikroorganismy se shluknou díky vazbám zprostředkovaným protilátkami

•       citlivost od 10^7/ml ---> spíše screening



b) agar diffusion test - vznikají proužky sraženin



c) immunomagnetické vychytávání - na principu selekce dotyčných mikroorganismů



d) značené protilátky

•       fluorescenční (FAT) či luminiscenční barvičky, zlato či enzymy (ELISA - enzyme linked
immunosorbent assay)

•       citlivost až 10^5 - 10^3/ml