Mikroskopie

Lidské oko má rozlišovací schopnost 0,07 mm.

Pro mikroskopii lze využít jakékoli vlnění  s vlnovou délkou kratší než jsou rozměry objektu.

•Pojmy a schémata mikroskopie

•A) Optická  - zobrazení struktur lišících se vzájemně absorbcí viditelného světla

                              - světelná, fázový a Nomarského kontrast

•B) Elektronová – nikoli světlo, ale elektrony

•C) Akustická


Optická (světelná) mikroskopie

Max. zvětšení 1500 X, max. rozlišení 200 nm

Výsledkem je neskutečný, zvětšený a převrácený obraz.









Varianty optického mikroskopu

Mikroskopie v temném poli

      - preparát je silný pro průchod paprsků

     - předmět pozorujeme v odražených paprscích

-          upravený kondenzor osvětluje preparát zespodu pod určitým úhlem – bez paprsků jdoucích
podél osy mikroskopu


metoda na pozorování velmi malých objektů (prvoci, bakterie) a jejich struktur zaživa






Speciální optické mikroskopy

Fázový kontrast

Různé části preparátu však vykazují různý index lomu – ohyb paprsků tím více čím index větší

          možnost pozorování živých objektů (pohyb, tvar b.) v nativním stavu bez barvení

•Při průchodu světelné vlny fázovým objektem se tato zpozdí, nedochází však ku změně její
intenzity, ale k posunu její fáze,  Původně světlé části se jeví jako tmavé a naopak „hustší“ části
buňky (vysoký index lomu) se jeví jako světlé (př: zářící endospory)



Interferenční mikroskop

•Pracuje se dvěma koherentními (interference schopnými) paprsky, jeden prochází objektem, druhý
mimo objekt.

Mikroskopy s diferenčním interferenčním kontrastem dle Nomarského (DIC):

Polarizátor srovnává vlny, jež jsou v různých rovinách; Nomarského destička v kondenzoru je hranol,
jež zpracovává polarizované světlo tak, že na preparát jdou dva paprsky souběžně vedle sebe.
V analyzátoru vidíme 3D obraz v závislosti na různém n

různých částí buňky. Zvýrazněním i malých rozdílů vznikne plastický obraz povrchu buňky.
















Imerzní objektiv:

Paprsek přecházející ze skla do imerzního prostředí svůj směr nemění a může se podílet na tvorbě
obrazu.


Imerzní prostředí - kapalina o stejném n jako krycí sklíčko.

Často cedrový olej (index lomu = 1,52).Imerze umožňuje korigovat některé opt. vady mikroskopu.





Suchý objektiv:

Paprsek vystupující z preparátu pod úhlem α se na rozhraní mezi krycím sklíčkem a vzduchem láme od
kolmice a nemůže se již podílet na tvorbě obrazu.