Koncepce předmětu spec. imunolog. metod Bi 9250C, zimní semestr 2009 Časový rozpis blokového cvičení z předmětu Speciální cvičení z imunologie 8 studentů, 2h/2kredity Pomůcky s sebou: Přezůvky a plášť, protokoly, svačina V praktickém cvičení se budeme zabývat a) jednak testy sledující aktivitu IS bezobratlých b) obratlovců Metody: Odběr a zpracování krve, hemolymfy, ELISA – stanovení přítomnosti protilátek proti B.b.s.l. – Borrelia garinii, Test aktivity lymfocytů, rychlá imunochromatografická metoda stanovení RSV viru – ukázka, rychlá imunochromatografická metoda stanovení FLU A, FLU B viru – individuální stanovení, Pozorování buněk hemolymfy (hemocyty hmyzu), Test aktivity fagocytózy pomocí MSHP částic u hemocytů hmyzu, Průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka – nepřímá hemaglutinace (HIT) Termín: 26.1.-29.1. 010 od 8.30hod út: odběr krve z prstu s cílem získání séra k vlastnímu stanovení parametrů, úprava destiček na ELI SA test, příprava Ag na ELISA test, rychlá imunochromatografická metoda stanovení RSV viru a FLU A, B viru a v průběhu dne seznámení se s obsahem cvičení st: zpracování séra (do ledničky), dokončení přípravy destiček k ELISA testu, pozorování buněk hemo lymfy (hemocyty hmyzu), Test aktivity fagocytózy pomocí MSHP částic u hemocytů hmyzu, čt: test akti vity lymfocytů (izolace lymfocytů a měření ATP), průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka (HIT), pá: ELISA test Úterý 9.00 Odběr krve z prstu Příprava destiček.- Et OH, prezentace metodik, promývání destiček, zjišťování koncentrace antigenu, ředění Ag; rychlá imunochromatografická metoda stanovení RSV viru a FLU A,B viru Středa 9.00 Zprac. krve na sérum, opracování destiček: - odstranění Ag a promytí, napipetování 100μl vazeb. roz toku s kaseinem, inkubace s kaseinem, promytí destiček; odběr hemolymfy a sledování fagocytárních s chopností hemolymfy pomocí MSHP částic, barvení, počítání fagocytózy Čtvrtek 9.00 Test aktivity lymfocytů – zpracování a izolace buněk sleziny z myši, Průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka – nepřímá hemaglutinace (HIT) Pátek 9.00 samotná ELISA jednotlivé kroky: ředění sér, rozložení vzorků na destičku, příprava zředěných sér: inkubace destičky se séry (naředit konjugát), promytí destičky, nanesení konjugátu, inkubace s konjugátem (nachystat substr. roztok s OPD), promytí a nanesení substr. roztoku, inkubace se substrátem, měření na ELISA-readeru