Samčí gametofyt mikrosporogeneze mikrogametogeneze SE micrograph of an early floral developmental stage Photo: C. J. Runions Cornell University Am. J. Botany Clarkia xantania (Onagraceae) blizna s čnělkou http://www.botany.org/ plantimages větší prašníky menší prašníky petaly sepaly s trichomy Samčí rozmnožovací orgán = tyčinka soubor tyčinek = androeceum • tyčinka se zakládá jako meristematický hrbolek na vrcholu květního základu • z baze nitka (filamentum) • z apexu prašník (anthera) prašný váček prašný váček konektiv (spojidlo) prašné pouzdro prašné pouzdro prašné pouzdro prašné pouzdro prašný váček prašné pouzdro tetrády tapetum exothecium endothecium mezofyl konektiv s CS nitka prašný váček stomium Řez prašníkem lilie Mikrosporogeneze vývoj mikrospor ze sporogenních buněk subepidermální buňky meristem. hrbolku primární archespor sporogenní buňky mikrosporocyty pylové mateřské buňky (PMC) tetrády mikrospor mikrospory redukční meiot. dělení kaláza Stavba stěny prašníku • exothecium = pokožková vrstva s kutikulou • endothecium = subepidermální, vláknitá vrstva • střední vrstva = mezofyl, parenchymatické pletivo • tapetum = výstelka prašného pouzdra – žlaznaté (sekretorické) – ameboidní = periplazmodium • stomium, hypostomium Mikrogametogeneze = vývoj samčích gamet mikrospory pylová zrna dvoubuněčná (tabák) pylová zrna tříbuněčná (Arabidopsis, trávy) mitóza 1x 2x nezralá stěna vakuola Meióza I a II Kaláza 1. mitóza jádro veget. buňky jádro generat. buňky odvodnění Pylová mat. buňka Tetráda volné mikrospory mikrospora nezralé pylové zrno zralé pylové zrno klíčící pylové zrno 2. mitóza migrace jádra Apertura dozrávání tvorba mikrospor tvorba gamet kalózová stěna spermat. buňky pylová láčka jádro Nicotiana tabacum L. SR1 Vakuolizované mikrospory polotenký řez, pryskyřice SPURR vnější tapetum vnitřní tapetum mezofyl endothecium Variabilita pylu Lilium Passiflora Accacia - polyady Torenia Arabidopsis Edlund et al. 2004 Lilium desikovaný pyl 3 (-4) apertury SEM, vysušeno metodou „critical poit dry“, pozlaceno Nicotiana tabacum L. Cucurbita pepo L. AQUASEM mnoho apertur – polysyfonické klíčení pylu Vývoj prašníku tabákuparafínový řez: alciánová modř jaderná červeň polotenký řez: toluidinová modř polotenký řez: toluidinová modř kryostatový řez: indigogenní lokalizace β-glukosidasy profáze I. mikrospory pylpyl pylpyl Barvení pylu - materiál květy a poupata: • Cyclamen persicum • Fuchsia sp. • Setscresea purpurea • Tradescantia sp. Hodnocení viability pylu • barvení – často nadhodnocuje životaschopnost pylu • fluorescenční mikroskopie – aktivita enzymů: esterázy (substrát FDA), peroxidázy (substrát TTC) • klíčivost pylu in vitro médium pro klíčení pylu in vitro: Brewbaker – Kwack (1964) 100 ml H3BO3 10mg Ca(NO3)2 . 4 H2O 30mg MgSO4 . 7 H2O 20mg KNO3 10mg + 10% sacharóza nebo 10% sacharóza a 1% agar (nanesení média na podložní sklo) Diferenciální barvení pylu Alexander 1969 96% ethanol 10 ml malachitová zeleň 10 mg destilovaná voda 50 ml glycerol 25 ml fenol 5 g chloralhydrát 5 g kyselý fuchsin 50 mg oranž G 5 mg ledová kys. octová 1 – 4 ml abortovaná pylová zrna jsou zbarvena zeleně, dobře vyvinutá (neabortovaná) červeně