Vývoj ELISA
Mgr. Lenka Chalupová
Obor: PřF FYZZ Fyziologie živočichů
Biovendor- Laboratorní medicína s.r.o
logo BioVendorRDP_BW

Postup vývoj CTRP-1 ELISA
l
lSestavení a optimalizace ELISA
lStabilitní testy komponent  (zrychlené)
lAnalytická charakteristika
lStabilitní testy soupravy
Bio 015

Sestavení
lSh Hu CTRP1
l
lMikrotitr. deska: Costar H.B Ab 3µg/ml
l
lkonjugát (Ab-HRP): 0,5 µg/ml
l
lvzorky sér, ředění 25x
l
lSubstrát: TMB
l        – inkubace se substrátem: 10min
l
lŘedící roztok: (MDB)
l
lStandard: 6,25; 12,5; 25; 50; 100; 200 ng/ml – rekombinantní protein
l
lQC High, QCLow, (IQC 1-4)
l
http://64.202.120.86/upload/image/articles/2006/biopen/biopen-elisa-schematic.jpg

Kalibrační křivka



Stabilitní testy komponent  (zrychlené)
l7,14,28 D
lRefer. , RT, 37°C, 4°C, -20°C
l±20%

Analytické charakteristiky
lSprávnost - Dilution linearity
l                       - Spiking recovery
lSensitivity   - Limit of detection
l                         - Assay sensitivity
lPřesnost     - Intra-assay
l                         - Inter-assay
lVliv matrice vzorků
lVliv přemraž./rozmraž na koncentraci vzorků
l
l
l

Analytické charakteristiky
- Dilution linearity (80-120%)
E:\Ph.D\prezentace\DL.JPG

Analytické charakteristiky
- Spiking recovery (80-120%)
E:\Ph.D\prezentace\recovery.JPG

Analytické charakteristiky
- Citlivost
l Limit of detection
l Assay sensitivity
-
E:\Ph.D\prezentace\sensitivita.JPG

Přesnost
l- Intra-assay (CV 15%)
l
l
l
l Inter-assay (CV ≤ 15%)
l
l
E:\Ph.D\prezentace\intra.JPG E:\Ph.D\prezentace\inter.JPG

Vliv matrice vzorků
E:\Ph.D\prezentace\matrix ef.JPG E:\Ph.D\prezentace\efekt matrice -graf.JPG


E:\Ph.D\prezentace\přemražení vzorků.JPG
Vliv přemraž./rozmraž. na koncentraci vzorků
                  (80-120%)

Stabilitní testy soupravy
l14D, 28D, 3M, 6M, 9M,12M,
lRefer. , RT, 37°C, 4°C, -20°C
l±20%
l

lDěkuji za pozornost J