REAKTIVNÍ FORMY KYSLÍKU A DUSÍKU A METODY JEJICH STANOVENÍ



REAKTIVNÍ METABOLITY       KYSLÍKU A DUSÍKU
lběžně vznikají v organismu
lfyziologický i patologický účinek
lvolné radikály, látky neradikálové povahy
lvolné radikály - atomy a molekuly, obsahující nepárový elektron, vznikají odejmutím či přijetím
elektronu
lreaktivní částice, řetězová reakce

ZDROJE VOLNÝCH RADIKÁLŮ
lENDOGENNÍ
lEnzymatické systémy
lNADPH oxidáza
lNOS
lPeroxidázy
lCytochrom P450
lXantin oxidoreduktáza
lAutooxidační rce.
lProteiny obsahující hem
lElektronový transportní řetězec mitochondrií
l
l
lEXOGENNÍ
lSložky potravy
lLéčiva
lUV záření
lIonizující záření
lZnečištěné prostředí
l

REAKTIVNÍ FORMY KYSLÍKU A DUSÍKU
l
l
l
l
l
l
lpřeměny a uvolňování energie
lenzymatické komplexy
lsignalizační molekuly
lmikrobicidní látky
l

ZABÍJEČSKÉ MECHANISMY FAGOCYTŮ



FAGOCYTÓZA A OXIDATIVNÍ VZPLANUTÍ



lkomunikace mezi neurony v mozku
l
lrelaxace cév
lendothelium-derived relaxing factor (EDRF)
l(atheroskleróza – nitroglycerin)
l
lzánětlivý mediátor
lprodukce RNS
FYZIOLOGICKÝ VÝZNAM NO

OXIDAČNÍ STRES A POŠKOZENÍ BIOMOLEKUL
• vznik > odbourávání ROS/RNS ››› oxidační stres
                         ››› vznik patofyziologických stavů




CHEMILUMINISCENČNÍ DETEKCE METABOLICKÉ AKTIVITY FAGOCYTŮ
lpřeměna chemické energie na světelnou
(fotony):


lluminofor + RONS → luminofor* → luminofor + světlo
lluminofory:
lluminol
lizoluminol
llucigenin
lpholasin
laktivátory:
lOZP
lPMA
lfMLP
lCaI
lstimulace LPS
lluminometr Immunotech LMT01 (citlivý detektor + fotonásobič)
l
l
CL

STANOVENÍ KONCENTRACE NITRITŮ GRIESSOVOU METODOU
l
lnepřímé spektrofotometrické stanovení nitritů  v médiu
lNO » autooxidace » nitrity, nitráty
lstanovujeme nitrity po diazotaci sulfanilamidu a kopulaci s N-(1-naftyl)ethylendiaminem
lměření absorbance                                            při 546 nm
lvýpočet koncentrace                                                              nitritů z
kalibrační                                                                  křivky
lstimulace LPS
NITRITY