Téma 06:        Struktura pestíků a prašníků lilie

                            A. Metoda zalévání do parafínu přes butanol


Ke studiu detailní struktury stavby pestíků a prašníků se obvykle používají parafínové řezy. Pro
zalití objektů do parafínu je nutné zhotovit přiměřeně velké segmenty, zafixovat je vhodnou fixační
směsí, odvodnit a převést do parafínu. K odvodnění lze použít etanolovou nebo butanolovou řadu.
V případě použití butanolové dehydratace již není nutné používat xylen jako intermédium, protože
parafín se v butanolu rozpouští. Po dostatečném prosycení objektů parafínem jsou segmenty
s rozehřátým parafínem nality do formičky, kde po orientaci segmentů do řad pomocí nahřátých
nástrojů a zchladnutí vytvoří parafínový blok. Oddělené jednotlivé bločky s jedním objektem krájíme
na mikrotomu. Nabarvené řezy uzavíráme do pryskyřice Eukitt®.


Rostlinný materiál:   květní poupata z řezaných rostlin – asijský hybrid

foto květů:


Vzorky:          301.1.  segmenty prašníků poupěte 5 cm dlouhého

301.2.    segmenty prašníků poupěte 6 cm dlouhého

301.3.    segmenty prašníků poupěte 9 cm dlouhého

301.4.    segmenty pestíku (blizna, čnělka, semeník) poupěte 5 cm dlouhého

301.5.    segmenty pestíku (blizna, čnělka, semeník) poupěte 6 cm dlouhého

301.6.    segmenty pestíku (blizna, čnělka, semeník) poupěte 9 cm dlouhého


Postup:
 1. odběr poupat z květenství a fixace ve směsi FAA (s 50% EtOH) (celé prašníky a celé pestíky)
doba fixace 88 hodin
 2. oplach 2x 30 minut v 50% etanolu a rozřezání prašníků a pestíků na příčné segmenty
 3. dehydratace butanolovou řadou (viz protokol)
 4. prosycování parafínem (Paraplast Plus®, teplota tání 56°C)
 5. zalévání do parafínu a zhotovení bločků


Literatura:

1.            Pazourková, Z. (1982): Botanická mikrotechnika. 1. vyd. Praha: Univerzita Karlova,
166 s.

2.            Kiernan, J. (1981): Histological and histochemical methods: Theory and practise.
1.Ed. Oxford: Pergamon Press, 344 s.

3.            Lux, A., Erdelská, O. (1998): Praktikum z anatómie a embryológie rastlín. Bratislava
: Univerzita Komenského, 135 s. ISBN 80-223-1229-0.

http://kfrserver.natur.cuni.cz/cz/edu/mikro/prep/tprep.htm