Pavel Kejík 2011
Blok 2: Nativní preparáty, fázový kontrast a Nomarského DIC
Pavel Kejík 2011
Cytologie a morfologie bakterií - cvičení

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Obsah
lNativní preparáty
lFázový kontrast
lNomarského DIC
lBacillus circulans CCM 2048
lBacillus megaterium CCM 2007
lNocardia carnea CCM 2756
lRhodococcus erythropolis CCM 277
lStreptomyces griseus CCM 3362
l
l

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Nativní preparáty
lSuspenze živých, někdy barvených buněk, často v kapce sterilní vody či fyziologického roztoku
l
lNapř. ke sledování dělení, pohybu, struktury či morfologie buněk
l
lDiagnostický význam především v parazitologii
l
lČasto pozorovány metodou fázového kontrastu

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Fázový kontrast
lDruh mikroskopie, který používá clony pracující na principu tzv. fázové destičky, která vytváří
ohybové spektrum
l
lNebarevné struktury, které se liší od okolních indexem lomu a tloušťkou mění fázi procházejícího
světla (neviditelné okem) – tato metoda převádí změny ve fázi na viditelné změny v intenzitě světla
l
lTo po průchodu pozorovanými mikrobiálními částicemi vytváří „duhový efekt“, který umožňuje
pozorování i nejjemnějších struktur u nebarvených a nefixovaných preparátů

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Nomarského DIC (Diferenciální Interferenční Kontrast)
lVložen pár Wollastonových hranolů a páru zkřížených polarizátorů tvoří řádný a mimořádný obraz
posunuté o hodnotu menší než rozlišovací mez (~0,1mm)
l
lNepřítomnosti rušivé „aury“ kolem objektů jako u fázového kontrastu
l
lPři malých hloubkách ostrosti lze rozlišit stupňovité vrstvy (~nm)

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Bacillus circulans CCM 2048
beze spor, misková kultura, nativní preparát
b
Fázový kontrast
Nomarského DIC
kmen Firmicutes, třída Bacilli, čeleď Bacillaceae, rod Bacillus

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Bacillus megaterium CCM 2007
terminální a subterminální nevyklenující endospory misková kultura, nativní preparát
kmen Firmicutes, třída Bacilli, čeleď Bacillaceae, rod Bacillus
Fázový kontrast
Nomarského DIC

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Nocardia carnea CCM 2756
Kultivace na krycím skle 6 dní 30°C, nativní preparát, vzdušné mycelium a řetízky spor, nomarského
DIC
kmen Actinobacteria, čeleď Nocardiaceae, rod Nocardia

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Rhodococcus erythropolis CCM 277
Kultivace na krycím skle 6 dní 30°C, nativní preparát, nepravidelné shluky buněk, nomarského DIC
kmen Actinobacteria, čeleď Nocardiaceae, rod Rhodococcus

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Streptomyces griseus CCM 3362
Kultivace na krycím skle 6 dní 30°C, nativní preparát, vzdušné mycelium a řetízky spor, nomarského
DIC
kmen Actinobacteria, čeleď Streptomycetaceae, rod Rhodococcus

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Streptomyces griseus CCM 3362
Kultivace ve vlhké komůrce 6 dní 30°C, nativní preparát, vzdušné mycelium a řetízky spor, hybridní
technika mikroskopování
kmen Actinobacteria, čeleď Streptomycetaceae, rod Rhodococcus

Pavel Kejík 2011
Pavel Kejík 2011
Pozorování pohybu bakteriální buňky
lDůležité je především rozlišit pohyb buněk od Brownova pohybu
l
lBrownův pohyb je nahodilý a pohyb buněk je většinou přímočarý skrze zorné pole mikroskopu