Morfologie prokaryotické buňky a morfologie kolonií Protokol 1 Vypracovala: Radka Tihelková Dne: 26.10.2011 Mikroorganismy • G+ tyčky – Lactobacillus brevis CCM 3805T – krátké tyčky – Nocardia carnea CCM 2756 – krátká rozpadavá vlákna • G+ koky – Corynebacterium glutamicum CCM 2428 - pleomorfní buňky • G- tyčky – Azotobacter vinelandii CCM 289 - pouzdra • Archea: – Haloferax mediterranei CCM 3361T Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení Metody • Gramovo barvení – nátěr bakteriální kultury, vysušení, fixace plamenem – krystalová violeť – 30 s, oplach vodou – Lugolovův roztok – 30 s, oplach vodou – etanol - 20 s, oplach vodou – safranin – 1 min, oplach vodou, osušení • Negativní barvení – nigrosin – kongo-červeň (Azotobacter)– po uschnutí převrstvení HCl, oplach vodou, metylenová modř – 3 min, oplach Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení Pozorování • Makroskopické snímky – digitální fotoaparát • Mikroskopické snímky – badatelský mikroskop - Olympus BX 50 RGB – videokamera Hitaschi – systém analýzy obrazu - LUCIA G 4.61 Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení Lactobacillus brevis CCM 3805T • stáří kultury 8 dní • makroskopický snímek nebyl pořízen z důvodu tekutého média • gramlabilita kultury byla způsobena dlouhou kultivací v lednici • G+ pravidelné tyčky, nesporulující, zřídka peritrichální bičíky Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení Gramovo barvení, světlé pole negativní barvení, světlé pole Nocardia carnea CCM 2756 • stáří kultury 11 dní • G+ nebo gramvariabilní • tyčky, vlákna, větvená vlákna • tvoří vzdušné a substrátové mycelium, které se rozpadá (fragmentuje) na krátké tyčky a koky • snímek negativního barvení se nezdařil z důvodu malého množství kultury na sklíčku Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení vlákna tyčka kok Gramovo barvení, světlé pole Corynebacterium glutamicum CCM 2428 Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení • stáří kultury 2 dny •G+ pleomorfní kyjovité buňky typická seskupení dvojic buněk do tvaru V palisády Gramovo barvení, světlé pole negativní barvení, světlé pole Azotobacter vinelandii CCM 289 Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení • stáří kultury 9 dní (Asbyho agar) • G- krátké tyčky až kokotyčky • tvoří pouzdra obalující dvojici buněk • peritrichálně umístěné bičíky Gramovo barvení, světlé pole kokotyčka Azotobacter vinelandii CCM 289 • na snímku jsou viditelná pouze pouzdra • nejsou patrné dvojice buněk uvnitř pouzder • barvení pouzder (kongo-červeň, metylenová modř), světlé pole Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení pouzdro Haloferax mediterranei CCM 3361T Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení • stáří kultury 10 dní • mukózní vzhled kolonií, žluté pigmenty • G- extrémně pleomorfní buňky Gramovo barvení, světlé pole negativní barvení, světlé pole Lactobacillus brevis CCM 3805T • 2,03 × 0,89 μm • typické G+ tyčky jsou kratší a silnější Haloferax mediterranei CCM 3361T • 2,72 × 0,42 μm • archea mají protáhlejší a užší buňky Bi7340 Cytologie a morfologie bakterií - cvičení Srovnání velikosti G+ baktérie a archea negativní barvení, světlé pole negativní barvení, světlé pole