§
METODY FAGOCYTÓZY

- vyšetření zahrnuje:
À krevní diferenciál - % zastoupení LEU
Á izolace LEU
 stanovení funkce LEU

4 skupiny testů na fagocytózu:

test na schopnost fagocytů odpovídat na chemotaktické stimuly /CHTS/
testy na sílu ADHEZE a INGESCE
testy na mikrobicidní aktivitu LEU
testy na metabolickou aktivitu LEU

test na schopnost fagocytů odpovídat na chemotaktické stimuly /CHTS/

·test migrace pod agarózou - postup: nalití agaru na misku a vyřezání otvorů
· plnění otvorů látkami
• kultivace, usmrcení BB, barvení
• odstranění agaru, mikroskopování
•
•princip
•CHEMOTAKTICKÝ STIMUL
•* vnitřní – produkty vlastních BB – komplement, imunokomplex
•* vnější – produkty ze stěn mikrobů – lipopolysacharid, GLP, manan
•
•CHEMOTAKTICKÝ INDEX :
•aktivní pohyb
•difuze
•CHI = A/B >1
•
CHTS
CHTS
LEU
Fyziol. roztok

testy na sílu ADHEZE a INGESCE
•A)test s metakrylátovými částicemi
LEU (popř. krev) + � MSHP /metakrylátové částice/
•
•
•na
•
•· B) test s kadmium-albuminovými částicemi
•
testadaing
na povrchové receptory fagocytu se naváží MSHP
necháme kultivovat, barvíme
-počítá se: fagocytární index (FI) a procenta fagocytózy (%F)
FI = počet fagocytovaných částic /na povrchu, uvnitř/ lomeno počtem
fagocytujících BB
 %F = počet fagocytujících BB lomeno celkový počet BB krát 100

-

•Testy na mikrobicidní aktivitu LEUt
• · test na počet přeživších bakterií
•kultivace
•
BAKTERIE ubytekbakterii
-hodnocení:
-* bakterie se vysejí na plotny
* spektrofotometricky,úbytek zákalu
· KANDIDATIVNÍ test – test na počet přeživších kvasinek
LEU+Candida
Trypanová modř - úbytek kvasinek, mn. přeživších buněk

testy na metabolickou aktivitu LEU
hodnocení: - pod vlivem CHTS při kultivaci dojde k fagocytóze, jejíž součástí je oxidativní
vzplanutí
-Redukce vlivem oxidačních pochodů v buňce. NBT nitroblue tetrazolium chlorid bezbarvý se změní na
modrý formazán – stanovení SPEKTROFOTOMETREM
-Touto metodou se prokazuje hlavně schopnost fagocytů tvořit kyslíkové radikály aktivací NADPH
oxidázy

•CHEMILUMINISCENČNÍ test
•pro kvantitativní hodnocení oxidativního vzplanutí
Vznikají elektronově excitované stavy, které emitují fotony. Emitované fotony zachycovány tzv.
luminoforem (luminol, izoluminol nebo lucigenin), spontánní  a aktivovaná CL
VYUŽITÍ v praxi :
zjištění : * nedostatečnosti či poruch jednotlivých fází fagocytózy
* aktivity fagocytů u pacientů s opakovanými infekcemi, opakovanou léčbou antibiotiky, nádorovým
onemocněním, artritidou či revmatoidními onemocněními, při zátěžových situacích
O2- .  + H2O H2O2  +  O- .  singletový kyslík
               NADPH
                oxidáza
O2 + el O2- .
luminometr