ZABÍJEČSKÉ MECHANISMY FAGOCYTŮ



REAKTIVNÍ FORMY KYSLÍKU A DUSÍKU
l
l
l
l
l
l
l
lFCE:
lpřeměny a uvolňování energie
lenzymatické komplexy
lsignalizační molekuly
lmikrobicidní látky
l

ZDROJE VOLNÝCH RADIKÁLŮ
lENDOGENNÍ
lEnzymatické systémy
lNADPH oxidáza
lNOS
lPeroxidázy
lCytochrom P450
lXantin oxidoreduktáza
lAutooxidační rce.
lProteiny obsahující hem
lElektronový transportní řetězec mitochondrií
l
l
lEXOGENNÍ
lSložky potravy
lLéčiva
lUV záření
lIonizující záření
lZnečištěné prostředí
l

FAGOCYTÓZA A OXIDATIVNÍ VZPLANUTÍ



ELEKTROCHEMICKÁ DETEKCE OXIDU DUSNATÉHO



OXID DUSNATÝ
lradikál (lichý počet valenčních elektronů)
l
ljedna z nejstudovanějších molekul posledních let NC (1998): Furchgott, Ignarro, Murad: za klíčové
objevy týkající se úlohy NO v kardiovaskulárním systému
l
lsyntázy oxidu dusnatého:
lneuronální (nNOS = NOS1)
linducibilní (iNOS = NOS2)
lepiteliální (eNOS = NOS3)
l
l

lkomunikace mezi neurony v mozku
l
lrelaxace cév
lendothelium-derived relaxing factor (EDRF)
l(atheroskleróza – nitroglycerin)
l
lmikrobicidní a zánětlivý mediátor
lprodukce RNS
FYZIOLOGICKÝ VÝZNAM NO

METODY STANOVENÍ NO A JEHO METABOLITŮ
lNEPŘÍMÉ:
l
lChemiluminiscence
lGriessova metoda
lFluorimetrické metody
l
-stanovení sekundárních metabolitů (nitrity, nitráty)
-selektivita a citlivost
-časová náročnost
-drahé reagencie
-
l
lPŘÍMÉ:
l
lElektrochemické metody
l
+přímé stanovení NO
+selektivita a citlivost
+minimální spotřeba reagencií
+jednoduchá kalibrace
+nízká pořizovací cena
+stanovení in vivo
l
l

NO ELEKTRODA
loxidace NO na povrchu elektrody za vzniku           potenciálu (jednoelektronový  transfer z NO
na             elektrodu za vzniku NO+)
lpovrch elektrody uzpůsoben k vysoké selektivitě a citlivosti k NO
lpolymery metaloporphyrinu a metalophthalocyaninu
lNO reaguje s centrálním atomem kovu skrze N atom                    ››› oxidace
l
l




STANOVENÍ KONCENTRACE NITRITŮ GRIESSOVOU METODOU
l
lspektrofotometrické stanovení nitritů v médiu
lNO » autooxidace » nitrity, nitráty
lměření absorbance při 546 nm
lvýpočet koncentrace                                                              nitritů z
kalibrační                                                                  křivky
lstimulace LPS                                               (makrofágy – TLR4)
NITRITY