1
TechnologickTechnologickéé
aspektyaspekty biosensorbiosensorůů
manipulace se vzorkemmanipulace se vzorkem –– prprůůtotoččnnéé technikytechniky
PrPrůůtotoččnnéé uspouspořřááddáánníí
ttechniky pouechniky použžíívváájjííccíí pro transport vzorku nebopro transport vzorku nebo
pomocných reagentpomocných reagentůů tok nosntok nosnéé kapaliny umokapaliny umožňžňujujíí
zrychlenzrychleníí a automatizaci analytických postupa automatizaci analytických postupůů aa
prosazujprosazujíí se výraznse výrazněě i v kombinaci s biosensory jakoi v kombinaci s biosensory jako
specifickými detektoryspecifickými detektory
vvariantou velmi blariantou velmi blíízkou biosensoru je pouzkou biosensoru je použžititíí
prprůůtotoččnnéého bioreaktoru (enzymovho bioreaktoru (enzymovééhoho ččii
imunochemickimunochemickéého) ve spojenho) ve spojeníí s klasickým detektorems klasickým detektorem
(fyzik(fyzikáálnlníím pm přřevodnevodnííkem)kem)
prprůůtokovtokováá injekinjekččnníí analýzanalýza (FIA), sekvena (FIA), sekvenččnníí injekinjekččnníí
analýza (SIA)analýza (SIA) a mikrodialýza mikrodialýzaa
2
FIAFIA
nnááststřřik vzorku do toku nosnik vzorku do toku nosnéého mho méédia a jeho nadia a jeho nařřededěěnníí –– disperzedisperze
disperzndisperzníí faktor D je dfaktor D je dáán pomn poměěrem prem půůvodnvodníí koncentrace vzorku akoncentrace vzorku a
maxima koncentrace v zmaxima koncentrace v zóónněě prochprocháázejzejííccíí detektorem, D = Cdetektorem, D = C00/C/Cmaxmax
velikost D se mvelikost D se můžůže u re u růůzných aplikaczných aplikacíí znaznaččnněě liliššit, ale vit, ale vžždy musdy musíí
být u danbýt u danéého pho přříípadu dosapadu dosažžena vysokena vysokáá reprodukovatelnost Dreprodukovatelnost D
FIA systFIA systéém je tvom je tvořřen pumpou P, vedenen pumpou P, vedeníím pro nosnm pro nosnéé mméédium Cdium C
(carrier) a eventu(carrier) a eventuáálnlníí pomocný reagent Rpomocný reagent R
ppo no nááststřřiku vzorku S (sample) pomociku vzorku S (sample) pomocíí injekinjekččnníího ventilu V se obho ventilu V se oběě
vvěětve spojtve spojíí, sm, smííchajchajíí v mv mííchacchacíí smysmyččce MC (mixing coil) a nakonecce MC (mixing coil) a nakonec
prochprocháázzíí detektorem D do odpadu W (waste)detektorem D do odpadu W (waste)
S
V MC
D W
C
R
P
PumpaPumpa
je nejje nejččastastěějiji peristaltickperistaltickáá, z, záákladem je krokový motor, ten otkladem je krokový motor, ten otááččíí
diskem, který mdiskem, který máá na obvodu nna obvodu něěkolik otokolik otoččných vných vááleleččkkůů -- rolerrolerůů. Ty. Ty
ppřři svi svéém pohybu tlam pohybu tlaččíí na pruna pružžnou hadinou hadiččku, a tak vytlaku, a tak vytlaččujujíí kapalinukapalinu
–– je vhodnje vhodnéé, aby pumpa m, aby pumpa měěla vla vííce kance kanáállůů (2 a(2 ažž 4)4)
–– výsledný tok je mvýsledný tok je míírnrněě pulzujpulzujííccíí (odvalov(odvalováánníí rolerrolerůů), hladký tok se), hladký tok se
dosdosááhne buhne buďď zvýzvýššeneníím otm otááčček pumpy (alespoek pumpy (alespoňň 30 rpm) nebo v30 rpm) nebo věěttšíšímm
popoččtem rolertem rolerůů (minimum 2, b(minimum 2, běžěžnněě 4 a4 ažž 10)10)
–– hadihadiččky jsou ze silikonu, tygonu (prky jsou ze silikonu, tygonu (průůhlednhlednéé PVC) nebo jinýchPVC) nebo jiných
odolnodolněějjšíších materich materiáállůů
–– prprůůmměěr hadir hadiččky spolu s rychlostky spolu s rychlostíí ototááčček urek urččuje pruje průůtok, rtok, růůznznéé hadihadiččkyky
umoumožňžňujujíí rrůůznznéé prprůůtoky v jednotlivých kantoky v jednotlivých kanáálech pumpylech pumpy
–– deldelšíší žživotnost hadiivotnost hadičček se dosek se dosááhne promazhne promazáánníím otm otááččivivéého systho systéémumu
silikonovým olejem, sousilikonovým olejem, souččasnasněě se zmense zmenšíší i pulzy a ohi pulzy a ohřřev hadiev hadiččekek
bezpulznbezpulzníí tok dosahujtok dosahujíí linelineáárnrníí ppíístovstovéé pumpypumpy, (drah, (drahéé))
prprůůtoky (flow rate) jsou kolem 0.1 atoky (flow rate) jsou kolem 0.1 ažž 5 ml/min, line5 ml/min, lineáárnrníí rychlostrychlost
toku je ztoku je záávislvisláá na prna průůmměěru trubiru trubiččekek
pokud je potpokud je potřřeba pracovat s organickým rozpoueba pracovat s organickým rozpouššttěědlem, kterdlem, kteréé
narunaruššujujíí hadihadiččky v pumpky v pumpěě, je mo, je možžnnéé poupoužžíít uzavt uzavřřenou lenou lááhevhev
naplnnaplněěnou organickou fnou organickou fáázzíí, kter, kteráá se vytlase vytlaččuje do systuje do systéému vodoumu vodou
ppřřititéékajkajííccíí z pumpyz pumpy
3
FIA souFIA souččáástisti
ppro vedenro vedeníí kapalin se poukapalin se použžíívajvajíí hadihadiččkyky o vnito vnitřřnníím prm průůmměěru 0.5 aru 0.5 ažž 11
mm, materimm, materiáálem je polypropylen, teflon, PVC nebo silikonovlem je polypropylen, teflon, PVC nebo silikonováá gumaguma
spojkyspojky pro smpro smíísenseníí dvou tokdvou tokůů mohou být ve tvaru Y, T nebo Wmohou být ve tvaru Y, T nebo W
spojovacspojovacíí komponenty zahrnujkomponenty zahrnujíí ššroubovacroubovacíí konektorykonektory propro
spojovspojováánníí trubitrubičček navzek navzáájem nebo s ventilyjem nebo s ventily čči detektoryi detektory
reakreakččnníí aa mmííchacchacíí smysmyččkyky jsou pomjsou poměěrnrněě variabilnvariabilníí; nap; napřř. ohebn. ohebnéé
trubitrubiččky dky déélky 100 alky 100 ažž 1000 mm se hust1000 mm se hustěě navinou do spirnavinou do spiráály naly na
nosnnosnéé tytyččce prce průůmměěru 2 aru 2 ažž 40 mm, d40 mm, dáá vyuvyužžíít se i gravitace pt se i gravitace přřii
proudprouděěnníí ve svislve svisléé spirspiráále, jinou mole, jinou možžnostnostíí je nje nááhodnhodněě "zauzlovan"zauzlovanáá""
trubitrubiččka (knitted coil)ka (knitted coil)
poupoužžíívajvajíí se takse takéé rrůůznznéé kolonky naplnkolonky naplněěnnéé kulikuliččkami, podle prkami, podle průůmměěrrůů
kolonky a jednotlivkolonky a jednotlivéé kulikuliččky se dostaneky se dostane řřada moada možžnostnostíí odod řřetetěězcezce
kulikuličček (single string glass beads) aek (single string glass beads) ažž po homogennpo homogenníí nnááplnplněě
labyrintovlabyrintovéé komkomůůrky v plasturky v plastu
mmííchanchanéé komkomůůrky umorky umožňžňujujíí vysokvysokéé disperzndisperzníí pompoměěryry
Spojky T, Y, W
VentilyVentily
pro npro nááststřřik vzorku, k tomutoik vzorku, k tomuto úúččelu se pouelu se použžíívváá 66--cestnýcestný
dvoupolohový ventil se smydvoupolohový ventil se smyččkou, zmkou, změěnou polohy senou polohy se
smysmyččka zaka zařřadadíí do hlavndo hlavníího toku mho toku méédiadia,, nnááststřřik seik se
nejjednodunejjednoduššeji proveji provááddíí ruruččnněě
mmateriateriáálem je nerez v kombinaci s teflonemlem je nerez v kombinaci s teflonem
uuplatplatňňujujíí sese elektricky ovlelektricky ovláádandanéé ventily solenoidnventily solenoidníí, s, s
krokovým motorem nebo pneumatickkrokovým motorem nebo pneumatickéé -- úúplnplnáá
automatizacautomatizacee prprůůtotoččnnéého systho systéémumu
4
ddůůleležžititáá je poloha detektoru vzhledemje poloha detektoru vzhledem
k proudk proudííccíímu mmu méédiudiu::
nnejbejběžěžnněějjšíší variantavarianta ((AA)) je detektorje detektor
paralelnparalelněě s tokem ms tokem méédia (wall embeded)dia (wall embeded)
ddetektor umetektor umííststěěný vný v úúststíí trubitrubiččkyky
(B, end on sensor) je(B, end on sensor) je ččasto vyuasto využžíívváánn
ppřři elektrochemicki elektrochemickéé detekci, je to vlastndetekci, je to vlastněě
jedno nebo vjedno nebo vííce vodivých uhlce vodivých uhlííkových vlkových vláákekenn
kaskkaskáádovdovéé uspouspořřááddáánníí (C)(C)
wall jet cela (D)wall jet cela (D)
ssignignáál ml můžůže být bue být buďď maximum nebo plochamaximum nebo plocha
ppííku odpovku odpovíídajdajííccíí zzóónněě vzorku provzorku proššlléé detektoremdetektorem
vve druhe druhéém pm přříípadpaděě je zkreslena informace o prje zkreslena informace o průůbběěhu gradientuhu gradientu
koncentracekoncentrace
UmUmííststěěnníí detektorudetektoru
A
B
C
D
det.
FIA modyFIA mody
single linesingle line -- ppro pouro použžititíí ve spojenve spojeníí se zejmse zejmééna biokatalytickýmina biokatalytickými
biosensory stabiosensory staččíí pouze jednolinkovpouze jednolinkovéé uspouspořřááddáánníí
nnááststřřik vzorku ventilem V mik vzorku ventilem V můžůže být automatizove být automatizováán pn přřididáánníím druhm druhéé
pomocnpomocnéé pumpypumpy
ččasto nenasto neníí ttřřeba ani peba ani přřididáávatvat žžáádndnéé pomocnpomocnéé reagenty a nosnýmreagenty a nosným
mméédiem je vhodný pufrdiem je vhodný pufr -- sspecifickým detektorem je pak vlastnpecifickým detektorem je pak vlastníí
biosensorubiosensoru
oobmbměěnou mnou můžůže být poue být použžititíí namnamíísto msto mííchacchacíí smysmyččky enzymovky enzymovééhoho
reaktoru ve spojenreaktoru ve spojeníí s nespecifickým detektorems nespecifickým detektorem, t, toto uspooto uspořřááddáánníí jeje
výhodnvýhodnéé pro enzymy s malou specifickou aktivitou, navpro enzymy s malou specifickou aktivitou, navííc jec je
žživotnost bioreaktoru oproti enzymovivotnost bioreaktoru oproti enzymovéé vrstvvrstvěě mnohonmnohonáásobnsobněě
vyvyššíšší
je moje možžnnéé poupoužžíít odlit odliššnnéé podmpodmíínky pro biochemickou reakci (napnky pro biochemickou reakci (napřř..
potpotřřeba pufru bleba pufru blíízkzkéého pH optimu enzymu) a pro vlastnho pH optimu enzymu) a pro vlastníí detekcidetekci
(zvý(zvýššeneníí pH pro detekci amoniaku), pro kterou se upravpH pro detekci amoniaku), pro kterou se upravíí podmpodmíínkynky
ppřřimimíísenseníím vhodnm vhodnéého pufru za výstup bioreaktoruho pufru za výstup bioreaktoru
V MC
D W
C (R)
P
5
FIA modyFIA mody twotwo--lineline viz dviz dřřííveve
merging zonesmerging zones -- realizovatelnrealizovatelnéé pouzepouze
s jednou pumpou jsou, kdy se dvs jednou pumpou jsou, kdy se dvěěmama
ventily nastventily nastřřikujikujíí zzóóna vzorku a zna vzorku a zóónana
reagentu do dvou linireagentu do dvou liniíí nosnnosnééhoho
mméédia, kterdia, kteréé se potse potéé smsmííchajchajíí;; ppřřii
drahdrahéém reagentu (NADH), vym reagentu (NADH), vyžžadujeaduje
synchronizaci obou ventilsynchronizaci obou ventilůů
reverse FIAreverse FIA –– „„dostupnýdostupný““ vzorekvzorek sese
nasnasáávváá ppřříímo do jednmo do jednéé linielinie
kontinukontinuáálnlněě, do druh, do druhéé se mse můžůžee
nastnastřřikovat reagentikovat reagent
zone samplingzone sampling poupoužžíívváá opakovanýopakovaný
nnááststřřik nejprve vzorku a pak jehoik nejprve vzorku a pak jeho
nanařřededěěnnéé zzóóny.ny. ČČasovasováánníí obouobou
ventilventilůů je rozhodujje rozhodujííccíí faktor, lzefaktor, lze
dosdosááhnout nahnout nařřededěěnníí aažž 1000x1000x
sample splittingsample splitting -- zzóóna nastna nastřřííknutknutééhoho
vzorkuvzorku sese ččáástesteččnněě odvodvááddíí prypryčč,,
kkritickritickéé mmíísto (sto (**) existuje mezi body) existuje mezi body
odvodvěětventveníí (divresion)(divresion) -- zzóóny seny se
vzorkem a mvzorkem a míísta napojensta napojeníí druhdruhéé linielinie
(merging), je zde n(merging), je zde níízkzkáá rychlostrychlost
prprůůtoku, ktertoku, kteráá mmáá podstatný vliv napodstatný vliv na
dosadosažženenéé zzřřededěěnníí
C
R
P
D W
W
S
zone sampling
sample splittingS
W
*
C
C
P
D W
FIA modyFIA mody
hydrodynamic injectionhydrodynamic injection -- ddáávkovvkováánníí vzorku bez pouvzorku bez použžititíí ventilu jeventilu je
nanesennaneseníí vzorku pomocvzorku pomocíí dvou pumpdvou pump
ppřři kombinaci P1 zapnuti kombinaci P1 zapnutáá, P2 vypnut, P2 vypnutáá (P1 on, P2 off) pracuje(P1 on, P2 off) pracuje
systsystéém v obvyklm v obvykléém uspom uspořřááddáánníí
ppřři pi přřepnutepnutíí pump (P1 off, P2 on) se nasaje zpump (P1 off, P2 on) se nasaje zóóna vzorku do smyna vzorku do smyččkyky
mezi body a, b, pmezi body a, b, přřitom je zablokovitom je zablokováán zpn zpěětný tok zavedentný tok zavedeníím výstupum výstupu
z detektoru do odpadu pz detektoru do odpadu přřes pumpu P1, ta pes pumpu P1, ta přři zastaveni zastaveníí tuto linii ituto linii i
daldalšíší linie uzavlinie uzavřře, take, takžže P2 nase P2 nasáávváá vzorekvzorek
kkoneoneččnněě ppřři ni náávratu do výchozvratu do výchozíího stavu (P1 on, P2 off) seho stavu (P1 on, P2 off) se
zachycenzachycenáá zzóóna vzorku pohybuje dna vzorku pohybuje dáále v systle v systéémumu
ppřřesnost desnost dáávkovvkováánníí je dje dáánana ččasovasováánníím obou pumpm obou pump
R
C
P1
D
W
hydrodynamic
injection
W
S
P2
a b
6
NaNařřededěěnníí
v komv komůůrcerce
zvzvěěttššovováánníí disperzndisperzníího faktoruho faktoru
bběžěžnými postupy (rychlost prnými postupy (rychlost průůtoku, prtoku, průůmměěr trubir trubičček, objem vzorku, dek, objem vzorku, déélkalka
mmííchacchacíí kolony) lze ovlivkolony) lze ovlivňňovat D v rovat D v ráámci jednohomci jednoho řřáádudu (cca(cca 33 aažž 2020))
dosadosažženeníí vyvyššíššího naho nařřededěěnníí jeje momožžnnéé poupoužžititíímm mmííchacchacíí komkomůůrky (mixingrky (mixing
chamber)chamber)
nosnnosnéé mméédium se vzorkemdium se vzorkem sese nechnecháá protprotéékat rozkat rozšíšířřeným meným míístem,stem,
ppřříípadnpadněě vybaveným elektromagnetickým mvybaveným elektromagnetickým mííchcháánníímm
nnevýhodou je zevýhodou je zááznam ve tvaru nznam ve tvaru níízkzkéého aho a šširokirokéého pho pííku, který zpomalujeku, který zpomaluje
mměřěřeneníí
pasívní aktivní
(s míchadlem)
plochy píků stejné
ale "ocásek" (tail)
FIA titraceFIA titrace
vvzorek se nastzorek se nastřřííkne do linie s mkne do linie s mííchacchacíí komkomůůrkou, a potrkou, a potéé
se mse měřěříí plocha pplocha pííku odpovku odpovíídajdajííccíí jednjednéé barvbarvěě
((acidobazickacidobazickééhoho,, ……)) indikindikáátorutoru
ddoba do odbarvenoba do odbarveníí pak urpak urččuje spotuje spotřřebuebu ččinidlainidla
potpotřřebnou k dosaebnou k dosažženeníí bodu ekvivalencebodu ekvivalence
C
R+I
P
D W
S
t1 t2 t3
7
FIA splitted flowFIA splitted flow
vvýhodnýhodnéé mmůžůže být rozde být rozděělenleníí zzóóny vzorku na dvny vzorku na dvěě linie (splittedlinie (splitted
flow), jedna se napflow), jedna se napřř. nech. necháá projprojíít enzymovým reaktoremt enzymovým reaktorem,, ppřředed
detektorem se obdetektorem se oběě vvěětve spojtve spojíí, na z, na zááznamu se objevznamu se objevíí dvdvěě maximamaxima
stanovenstanoveníí dvou reagentdvou reagentůů vedle sebevedle sebe -- nnapapřř. sachar. sacharososa a gluka a glukososa vea ve
vzorku: detektor je biosensor s GOD, v bioreaktoru jevzorku: detektor je biosensor s GOD, v bioreaktoru je
imobilizovimobilizováána invertna invertasasa s mutarota s mutarotasasou; prvnou; prvníí ppíík odpovk odpovííddáá volnvolnéé
glukglukosose, druhý pak nave, druhý pak navííc glukc glukosose vznikle vznikléé v reaktoru zev reaktoru ze sasacharcharososyy
C
P
D W
S bioreaktor
zpoždění v bioreaktoru
FIA stopped flowFIA stopped flow
zzastavenastaveníí toku (stopped flow) v dobtoku (stopped flow) v doběě, kdy je z, kdy je zóóna vzorku vna vzorku v
detektoru, mdetektoru, můžůže poskytnout cenne poskytnout cennéé informace o dinformace o děějjíích v detektoruch v detektoru
(biosensoru)(biosensoru)
ppodle tvaru zodle tvaru zááznamu lze usuzovat na reakznamu lze usuzovat na reakččnníí prprůůbběěhh
tok
zastaven
neúplná reakce
kompletní reakce
rozklad produktu
či spotřeba analytu
8
FIA imunoFIA imuno
pprrůůtotoččnnéé techniky dnes sttechniky dnes stáále vle vííce pronikajce pronikajíí taktakéé do oblastido oblasti
imunochemických stanovenimunochemických stanoveníí, kde p, kde přřininášíáší zrychlenzrychleníí analýz aanalýz a
zlepzlepššeneníí reprodukovatelnosti výsledkreprodukovatelnosti výsledkůů ddííky opakovanky opakovanéé regeneraciregeneraci
ttééhohožž imunospecifickimunospecifickéého nosiho nosiččee
ččasto je pouasto je použžíívváán velice komplikovaný systn velice komplikovaný systéém, nejjednodum, nejjednoduššíšší
varianta sestvarianta sestáávváá ze dvou pump a ventilze dvou pump a ventilůů
průtočný imunoreaktor
D W
W
W
C
on
R
off
nasávání vzorku,
nanesení na kolonu
S
D W
W
W
C
off
R
on
eluce imunokomplexu,
detekce
LabLab--OnOn--Chip konceptChip koncept
systsystéém integrovaný nam integrovaný na ččipuipu –– prprůůtotoččnnéé kankanáálky (nilky (nižžšíší
verze na bverze na báázi plastovzi plastovéého mikrofluidnho mikrofluidníího modulu; veho modulu; ve
vyvyššíšších verzch verzíích na bch na báázi kzi křřememííku i mikropumpy, ventily,ku i mikropumpy, ventily,
detektory,detektory, ……))
systsystéém zamm zaměřěřený na jedinou konkrený na jedinou konkréétntníí aplikaci, zmaplikaci, změěnyny
mměřěřííccíího protokoluho protokolu ččasto vyasto vyžžadujadujíí nnáákladnkladnéé úúpravypravy ččipuipu
ppřři porui porušše libovolne libovolnéé ččáástisti ččipuipu
je tje třřeba výmeba výměěna celna celéého moduluho modulu
alternativaalternativa –– „„programovatelnýprogramovatelný““
mměřěřííccíí systsystéémm
9
SIA Sequential Injection AnalysisSIA Sequential Injection Analysis
robustnrobustníí, jednoduch, jednoducháá a va vššestrannestrannáá technika zalotechnika založženenáá nana
programovatelnprogramovatelnéém toku lm toku láátektek
ppřřesnesnéé odmodměřěřeneníí mikrolitrových objemmikrolitrových objemůů a jejich na jejich nááslednslednéé
mikrofluidnmikrofluidníí zpracovzpracováánníí poupoužžititíím reverznm reverzníího, zastavenho, zastavenéého neboho nebo
urychlenurychlenéého toku umoho toku umožňžňuje nuje náávrh stanovenvrh stanoveníí prostprostřřednictvednictvíímm
popoččíítatačče ve forme ve forměě „„softwaresoftware““
roztoky prochroztoky procháázzíí kankanáálky monoliticklky monolitickéé mikrofluidnmikrofluidníí struktury,struktury,
namontovannamontovanéé na multikanna multikanáálový plový přřepepíínacnacíí ventilventil –– konceptkoncept
LabLab--OnOn--ValveValve
SIA / LOVSIA / LOV
řříízenzenáá „„syringesyringe““ pumppumpa pro sekvena pro sekvenččnníí
transport roztoktransport roztokůů ppřřes ventil does ventil do
zadrzadržžovacovacíí smysmyččky, a z nky, a z níí pak dopak do
prprůůtotoččnnéé mikrocely (optovlmikrocely (optovlááknovknováá
detekce)detekce)
typicktypickéé objemy pobjemy přři stanoveni stanoveníí jsoujsou 55 aažž
2525 µµl vzorekl vzorek, reagent 25 to 50, reagent 25 to 50 µµll a 100a 100
aažž 200200 µµl nosný pufrl nosný pufr
10
SIA / LOVSIA / LOV
prprůůtotoččnnáá cela integrovancela integrovanáá v LOVv LOV
umoumožňžňuje muje měřěřeneníí absorbance (A,absorbance (A,
ppřřííp. s delp. s delšíší optickou droptickou drááhou B) ahou B) a
fluorescence (C)fluorescence (C)
promproměěnnnnáá konfigurace tvokonfigurace tvořřenenáá
ppřříívodnvodníími trubimi trubiččkami, optickýmikami, optickými
vlvláákny a zarkny a zaráážžkamikami
A
B
C
PMTPMT
LEDLED nebonebo llaseraser
llampampaa detektordetektor
LOV aplikaceLOV aplikace
enzymenzymovováá stanovenstanoveníí substratsubstratůů a inhibitora inhibitorůů
mměřěřeneníí enzymovenzymovéé aktivityaktivity
„„bioligand interaction assaysbioligand interaction assays““ (BIA)(BIA)
affinitaffinitnníí chromatograchromatografiefie
ionionexovexováá chromatograchromatografiefie
spojenspojeníí s biosensorys biosensory
ukukáázka mzka měřěřeneníí koncentracekoncentrace
glukosy pomocglukosy pomocíí GDH/NADGDH/NAD++
11
Bead injectionBead injection
poupoužžititíí prprůůsvitných mikrosvitných mikroččáásticstic
jako vymjako vyměěnitelnnitelnéého nosiho nosiččee
biorekognibiorekogniččnníí komponentykomponenty
sloupecsloupec ččáástic pstic přřesnesněě naplnnaplníí prostorprostor
prprůůtotoččnnéé cely, vazba komplementcely, vazba komplementáárnrnííchch
biomolekul se detekuje spektroskopickybiomolekul se detekuje spektroskopicky
(nap(napřř. v UV pro b. v UV pro bíílkoviny, plkoviny, přři jiných vlnových di jiných vlnových déélklkáách pro rch pro růůznznéé
kofaktory,kofaktory, ……))
kulikuliččky jsou v cele drky jsou v cele držženy mechanicky pomoceny mechanicky pomocíí vhodnvhodnéé zarzaráážžky sky s
otvorem menotvorem menšíším nem nežž prprůůmměěrr ččáástice, po mstice, po měřěřeneníí (nebo po výrazn(nebo po výraznéémm
poklesu vazebnpoklesu vazebnéé kapacity sekapacity se
obrobráácenceníím smm směěru prru průůtoku z celytoku z cely
jednodujednodušše vyple vyplááchnouchnou
vyvyššíšší citlivost necitlivost nežž jednoduchjednoduchéé
prprůůtotoččnnéé stanovenstanoveníí –– akumulaceakumulace
analytu na mikroanalytu na mikroččáásticsticííchch
CE Capillary electrophoresisCE Capillary electrophoresis
pohyb roztokpohyb roztokůů vyvolvyvoláán elektroosmotickou siloun elektroosmotickou silou
dole srovndole srovnáánníí profilprofilůů fluorescenfluorescenččnnííchch
barviv pbarviv přři toku vyvolani toku vyvolanéém mechanickym mechanicky
nebo elektroosmotickynebo elektroosmoticky
elektrokinetickelektrokinetickéé „„zaostzaostřřenení“í“ zzóóny vzorkuny vzorku
ukukáázkazka ččipu pro CE separaceipu pro CE separace
12
CE naCE na ččipuipu
miniaturizaceminiaturizace –– kombinace s dalkombinace s dalšíšími technikamimi technikami
(biosensor, PCR, ...)(biosensor, PCR, ...)