SYLABUS

Moderní metody buněčné biologie


1. Buněčné kultury (J. Hofmanová, N. Straková, Z. Tylichová, J. Lauková, O. Zapletal B. Šafaříková)

Kultivace buněk in vitro a zařízení laboratoře: ukázka vybavení laboratoře, obsluha flow boxu, typy
plastů pro buněčné kultury, automatické pipety, bezpečnost práce, pasážování buněk, počítání částic
na CASY, určení životnosti buněk barvením (eosin, propidium jodid)
Detekce apoptotických buněk: stanovení apoptotického indexu - barvení pomocí DAPI (fluorescenční
mikroskopická detekce buněk s kondenzovaným a fragmentovaným chromatinem).

Detekce lipidových dropletů v cytoplasmě: zpracování buněk pro barvení lipidových dropletů
s využitím Nile Red (9-diethylamino-5H-benzo(alpha)phenoxazine-5-one) a detekce fluorescence pomocí
průtokové cytometrie (FACS VERSE).

Stanovení diferenciace buněk linie nádoru kolonu (HT-29): stanovení alkalické fosfatázy
kolorimetricky (alkalická fosfatáza štěpí bezbarvý substrát 4-p-nitrofenyl fosfát za vzniku žlutého
zbarvení) s pomocí přístroje FluoStar.
2. Fluorescenční a konfokální mikroskopie ( E. Bártová, L. Stixová, R. Fedr):
Princip funkce fluorescenčního mikroskopu (výhody a limitace), rozdíly mezi konvenční a konfokální
mikroskopií. Pozorování trojrozměrně fixovaných interfázních jader, ve kterých je fluorescenčně
značený gen a jinou fluorescenční značkou obarven celý chromozom, na kterém se daný gen nachází.
3. Biochemické metody (J. Vondráček, M. Kabátková, Jana Svobodová ):
 Izolace celkové RNA, stanovení koncentrace a kvality:
Izolace RNA z připraveného buněčného lyzátu pomocí komerčního kitu, stanovení koncentrace RNA a
její čistota na přístroji Nanodrop ND-1000 Spectrophotometer.
Detekce oxidu dusnatého pomocí ozonové chemiluminiscence (A. Lojek, M. Číž, J. Víteček):

Úvod do problematiky stanovení NO a jeho metabolitů (dusičnan, dusitan, nitrososloučeniny) pomocí
ozonové chemiluminiscence a praktická demonstrace stanovení NO ve vydechovaném vzduchu.