Imunochromatografické stanovení nepřítomnosti protilátek proti HIV viru


Teorie: In vitro test, vizuální odečet, kvalitativní immunoassay pro detekci protilátek proti HIV-1
a HIV-2 v lidském séru, plazmě nebo celé krvi. Zjištění protilátek u infikovaných jedinců.

Virové onemocnění AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) je charakterizováno změnami populace T
lymfocytů. U infikovaného jedince virus způsobuje vyčerpání Th lymfocytů což vede k nižší
obranyschopnosti organismu. Virus existuje ve dvou příbuzných typech HIV-1 a HIV-2. Přítomnost viru
HIV vyvolává tvorbu specifických protilátek proti oběma typům.


Cíl: Potvrzení nepřítomnosti protilátek proti HIV viru

Metoda: imunochromatografická metoda v podobě kazetového testu (precipitace)

Materiál:  kazetový TEST, vzorek ze séra jedince

Postup: Odběr vzorku:

1. z prstu do tubiček s EDTA nebo do eppendorfek standardní metodou s cílem získání krve, séra nebo
plazmy

2. z žíly s cílem získání krve

Vzorky uchovávat nanejvýš 7 dní v chladu ledničky

Aplikace 50μl ze všech zdrojů (krev, sérum, plazma) na místo v kazetě označené šipkou a čekat od
15-60min a odečíst výsledek. V případě použití krve, se za 1 min po aplikaci vzorku přidává 1 kapka
Chase pufru do stejného místa jako vzorek.


Vzorek je aplikován na destičku. Jak migruje přes konjugátovou destičku, rozředí se a smíchá
s selenium-antigen, který je vázán na destičce, koloidním konjugátem. Tento roztok migruje přes
pevnou fázi do pacientovy části (panelu), kde jsou imobilizované rekombinantní antigeny a
syntetické peptidy. Jestliže jsou ve vzorku protilátky, vážou se na antigen-selenový koloid a na
antigen v pacientově okénku. Jestliže protilátky ve vzorku nejsou, antigen-selenový koloid projde
pacientovým okénkem a nevytvoří se žádná červená linie. Pro kontrolu kvality je zahrnut kontrolní
panel.








 Interpretace výsledků:

- pozitivní: rudý proužek se objeví jak na kontrolním panelu, tak na pacientově panelu


- negativní: rudý proužek se objeví pouze v kontrolní části


- neplatný: nikde se neobjeví rudý proužek






Výsledky: Vzorek krve naředěný přidáním kapky Chase pufru projde během inkubace všemi částmi
kazetového testu. Po cca 15 min dojde k vytvoření zřetelného proužku v kontrolní části testu (Obr.
2).


HIV test





Obr. 2: Kazetový test pro detekci protilátek proti HIV s viditelným červeným proužkem v kontrolní
části. Pacientova část je prázdná, protože testovaný vzorek neobsahoval protilátky proti HIV, které
by se mohly navázat na zde imobilizovaný antigen.



Poznámky:

- test je pozitivní, i když je proužek v pacientově části silnější nebo slabší, než v části
kontrolní

- síla proužku v pacientově části nekoreluje s titrem protilátek v jeho krvi

- negativní výsledek nevylučuje možnost infekce HIV. Falešně negativní výsledek se může objevit,
při:

   - množství protilátek nižším, než je dolní hranice testu

   - infekci variantou viru, na jejíž stanovení není test určen

   - HIV protilátky pacienta se nevážou na specifické antigeny v testu

   - špatná manipulace se vzorkem se odrazí ve špatné vaznosti protilátek

- pozitivní vzorky by měly být znovu otestovány jinou metodou a porovnány s celkovým klinickým
stavem

Existují ověřovací testy tohoto setu při ověřování pozitivity či negativity u pacientů i
negativních jedinců. Všechny testy byly 100% v ověření správnosti těchto kazetových testů.