CVIČENÍ Z KLINICKÉ BIOCHEMIE
____________________________________
1/3
ÚLOHA Č.3 – STANOVENÍ NÍZKOMOLEKULÁRNÍCH LÁTEK
(studenti pracují ve dvojicích)
STANOVENÍ GLUKOSY
Stanovení glukosy v krevním séru či plasmě má velký význam při diagnostice diabetu.
Stanovení této nízkomolekulární látky může probíhat chemickou nebo enzymatickou cestou.
Při chemické cestě se může např. využívat redukčních vlastností monosacharidů nebo jejich
reakce s aminy za vzniku Schiffových bazí. V praxi je ale upřednostňováno stanovení pomocí
enzymů, nejčastěji za přispění glukosaoxidasy. Při této reakci nedochází pouze k oxidaci
glukosy, ale také vzniku peroxidu vodíku, který je možno stanovit amperometricky nebo
využít v následné enzymové reakci ke tvorbě barevného produktu. Méně rutinní je pak využití
enzymů hexokinasa nebo glukosadehydrogenasa.
A) Proveďte stanovení pomocí komerčního kitu, a to bez deproteinace (před vlastním
stanovením si řádně přečtěte přiložený návod).
Na enzymové metodě stanovení glukosy lze dokumentovat negativní interferenci
kys. askorbové.
Při enzymovém stanovení glukosy k pokusu nasaďte blank, standard, vzorek séra
a vzorek séra s 50 µl kys. askorbové.
Do protokolu popište mechanismus provedeného enzymatického stanovení + rovnici reakce,
jakým kitem bylo stanovení provedeno, tabulku naměřených hodnot, všechny výpočty,
fyziologické hodnoty. Okomentujte naměřené výsledky ve vztahu k fyziologickým hodnotám
a přesnost vlastní práce.
Vysvětlete vliv kys. askorbové na enzymatické stanovení glukosy.
B) Stanovení koncentrace glukosy ve vlastní kapilární krvi pomocí osobního
glukometru.
Do protokolu uveďte naměřenou hodnotu glukosy ve vaší krvi a fyziologické rozmezí. Jestliže
vaše hodnota nespadá do fyz. pokuste se to zdůvodnit (oběd, svačina, sladkost, vynechání
snídaně …).
CVIČENÍ Z KLINICKÉ BIOCHEMIE
____________________________________
2/3
STANOVENÍ DUSÍKATÝCH METABOLITŮ V SÉRU – KREATININ
Hlavní dusíkaté odpadní produkty, které se vyskytují v krevním séru, jsou močovina, kreatinin
a kyselina močová. Tyto látky vznikají jako konečné produkty metabolismu aminokyselin
a nukleových kyselin.
Množství močoviny v séru je závislé na množství odbouraných bílkovin a na vylučovací
funkci ledvin. Většina zdravých lidí má koncentraci močoviny v séru v rozmezí 3-8 mmol/l.
Tato koncentrace je odrazem složení stravy (příjem bílkovin), a pokud nejsou porušeny funkce
jater nebo ledvin, i odrazem katabolismu bílkovin. Zvýšené hladiny se objevují zejména
při ledvinových poruchách, otravách, zvýšeném přísunu bílkovin atd., snížené jsou např.
při akutním selhání jater.
Množství kreatininu vytvořené v organismu je na rozdíl od močoviny jen velmi málo závislé
na přísunu proteinů, kreatinin je produktem metabolismu svalových buněk. Jeho hladina v
séru je poměrně konstantní a závislá na množství svalové hmoty organismu, je ovlivňována
svalovou prací. Stále hodnoty kreatininu v séru se využívá pro ověření vylučovací funkce
ledvin – tzv. ledvinové (kreatininové) clearence. Zvýšené hodnoty kreatininu se objevují
zejména při poruchách funkce ledvin, snížení např. při svalové dystrofii.
Obsah kys. močové, která je konečným produktem metabolismu purinů se zvyšuje při
nadměrném rozpadu buněk (pneumonie, leukemie, anemie atd.), v těhotenství, při hladovění
atd. Při ledvinové nedostatečnosti se její hladina rovněž zvyšuje, ale pomaleji než hladina
močoviny a kreatininu.
Úkol:
Komerčními kity stanovte koncentraci kreatininu v neznámém vzorku séra, ve dvou vzorcích
moči a v kontrolním séru (před vlastním stanovením si řádně přečtěte přiložený návod).
Vyhodnoťte funkci ledvin na základě kreatininové clearence při denní produkci moči 1.5 litru.
Do protokolu uveďte princip stanovení (rovnici reakce), jakým kitem bylo stanovení
provedeno, tabulku naměřených hodnot, všechny výpočty, fyziologické hodnoty a hodnoty
deklarované pro kontrolní sérum. Okomentujte naměřené výsledky ve vztahu k fyziologickým
a deklarovaným hodnotám a přesnost vlastní práce.
CVIČENÍ Z KLINICKÉ BIOCHEMIE
____________________________________
3/3
Závěr: Do protokolu stručně shrňte všechny výsledky z tohoto cvičení.
Doplňující otázky:
• Které ovoce může sloužit jako přímý zdroj glukosy? (1 bod)
a) jablko
b) hroznové víno
c) banán
• Jak se liší denní průběh hladiny krevní glukosy u neléčeného diabetika a zdravého
člověka (před jídlem, po jídle)? (2 body)
• Jak se liší diabetes 1. a 2. typu? (2 body)