7-Centrifugace


1.      Srovnáváme pohyb částic o stejné hmotnosti a rozměrech. Co bude mít větší s

            a) tuhá nebo ohebná tyčinka?

b) plná nebo dutá koule?



2.      Popište rovnici separace 2 látek o hodnotách s[1] a s[2] sedimentujících v jedné kyvetě!


s = v/ω^2r          v = dr/dt  s = dr/dt. ω^2r

                                                                   ln  r

r = f(t), ω^2 = konst.


s ω^2. dt = dr/r  s ω^2. t = ln r

                                                                                          t


3.      Makromolekuly sedimentují ve vodě při 20 ^0C, byla zjištěna hodnota


s^0[20,WP]  = 14,2 S, D = 5,82 . 10^-10 m2.s^-1 a  " = 0,74 . 10^-3 m3 . kg^-1.


M[r ]= s R T / D (1- " ρ[l]) , 1S = 10^-13 s


V = dr/dt = M[r] . (1- " ρ[l]) . D . ω^2r /RT


Vypočtěte M[r]!



4. Předpokládáte, že reagens X způsobí kovalentní vazbu mezi řetězci DNA. Jak to potvrdíte pomocí
centrifugace?



5. Reagens Y způsobilo, že s vysoce kompaktní bílkoviny kleslo o ca 40%. Jaký účinek Y na bílkovinu
lze předpokládat, jestliže je pík při sedimentaci a) užší, b) širší?



6. Bílkovina dala při sedimentaci ve vodě jeden pík odpovídající M[r] 50 000. V 6 M guanidinium
chloridu se objevily 2 píky odpovídající 5000 a 15 000. Plocha pomalejšího píku je 2/3 rychlejšího.
Jaké závěry lze učinit?



7. DNA při centrifugaci v CsCl dala jeden pík. Po působení etidium bromidu dala 2 píky, plocha
rychlejšího byla dvojnásobná oproti pomalejšímu. Co z toho lze vyvodit?




8. Zjišťujeme s suprahelikální DNA v závislosti na koncentraci etidium bromidu. Hodnota s nejprve
klesá, po dosažení minima pak roste. Co se děje s DNA?




9. Lipoprotein je centrifugován v 1 M NaCl. Pík se objevil u dna a pohyboval se k hladině.
Vysvětlete!