Chemické vlastnosti, struktura a interakce nukleových kyselin Bi7015 •Chemická reaktivita NK. • •Hydrolýza NK, redukce, oxidace, nukleofily, elektrofily, alkylační činidla. •Mutageny, karcinogeny, protinádorově účinné látky. •Interakce DNA s UV a ionizujícím zářením. •Maxamovo a Gilbertovo sekvencování, chemické strukturní sondy. •Poškození DNA a jeho detekce. •Základní mechanismy opravných procesů •Nekovalentní interakce DNA s malými molekulami. • •Iontové interakce, vazba do žlábku, interkalace. •Bisinterkalátory, „provlékající se“ (threading) interkalátory, metalointerkalátory. •Přenos náboje/elektronů zprostředkovaný dvoušroubovicí DNA. •Analytické využití interkalátorů a látek vázajících se do žlábku; chemické nukleázy. •Interakce DNA s proteiny. • •Principy, funkční skupiny DNA a proteinů zprostředkující vzájemné interakce. •Nespecifické a sekvenčně specifické interakce. •Příklady sekvenčně specifických interakcí (např. helix-otáčka-helix, zinkové domény). HMG proteiny. •Příklady: Mechanismus interakce restrikčních endonukleáz s DNA. Interakce proteinu p53 s DNA. •Základní metody studia interakcí bílkovin s DNA; EMSA, imuno-techniky, footprinting DNA. •Enzymy účastnící se metabolismu NK. • •DNázy, RNázy, polynukleotidfosforyláza. •Endonukleázy rozpoznávající jednořetězcové NK •Enzymy účastnící se opravných procesů. •Topoizomerázy, helikázy. •Ligázy, polynukleotid kináza. •Restrikční endonukleázy, metyltransferázy; metylované baze, metylace DNA u prokaryot a eukaryot. •Využití enzymů při studiu struktury a interakcí DNA. •Struktura a funkce ribonukleových kyselin a regulace genové exprese. • •Ribozomální, transferové a informační RNA. •Sestřih prekurzorových RNA. •Katalytické funkce RNA, samosestřih. •RNA interference. Regulace genové exprese, úloha RNA; vztah k metylaci DNA. Metodické přístupy. •Elektrochemie nukleových kyselin a DNA biosenzory. • •Vztah mezi strukturou DNA a jejím chováním na rtuťových a uhlíkových elektrodách. •Elektrochemické biosenzory pro hybridizaci DNA. Značení DNA elektroaktivními skupinami. •Elektrochemické biosenzory pro poškození DNA. Jak jste na tom s chemií? Jak jste na tom s chemií? Základní pojmy •vodíková vazba •iontové interakce •hydrofóbní interakce a stacking („stohové interakce“) •esterová vazba •glykosidová vazba N-glykosidová vazba •peptidová vazba •hydrolýza •oxidace, redukce •elektrofil, nukleofil •tautomerie, enol-keto, amino-imino • • -vaznost -možnost tvorby řetězců, sítí -vhodné reaktivní skupiny pro anabolické a katabolické děje -strukturní funkce iontů -katalytické vlastnosti -prostředí Vodíková vazba d- d+ d- elektronegativní atom (O, N) elektronegativní atom s párem „nevazebných“ elektronů (O, N) Vodíková vazba •naprosto zásadní význam pro biologii •vlastnosti vody (!) •párování bazí v NK •struktura bílkovin •DNA-protein interakce •řada dalších interakcí Tautomerie •izomerie mezi enol-keto, amino-imino, laktam-laktim • •v bazích DNA: klíčová stabilita jedné z možných tautoforem, neboť předurčuje specificitu párování •mutagenní efekt některých modifikací bazí Elektrofil, nukleofil •elektrofil, elektrofilní centrum: částice nebo místo v molekule s elektronovým deficitem (parciálním kladným nábojem) •s oblibou reaguje s nukleofilem • • •nukleofil, nukleofilní centrum: částice nebo místo v molekule s elektronovým přebytkem (parciálním záporným nábojem) •s oblibou reaguje s elektrofilem •skupiny obsahující N, O • Esterová vazba •estery: produkty kondenzace (reakce za odštěpení vody) kyselin a alkoholů •lipidy •v NK: fosfodiestery mezi dvěma cukernými zbytky Peptidová vazba •= vlastně vazba amidová •produkt kondenzace karboxylové kyseliny a aminu glykosidová vazba •glykosidy: deriváty cukrů, ve kterých je poloacetalová nebo poloketalová skupina nahrazena jiným zbytkem (např. alkoholem) •u nukleosidů – N-glykosidy – je to dusíkaté báze (nukleobáze) Hydrolýza •štěpení chemické vazby přenosem na molekulu vody •u NK a proteinů v kyselém nebo alkalickém prostředí •fosfodiesterová vazba •N-glykosidová vazba •peptidová vazba Oxidace, redukce •reakce zahrnující přenos elektronů •často za účasti kyslíku – nejběžnější oxidační činidlo Iontové interakce •někdy „solné můstky“ (=iontová interakce+vodíková vazba) •opačné náboje se přitahují •fosfátové zbytky v DNA (-) •protonizované dusíkaté skupiny v bílkovinách (Arg, Lys, His) (+) •karboxylové skupiny v bílkovinách (-) •navzájem nebo s jinými molekulami, anorganickými ionty (Mg2+) apod. Hydrofóbní interakce •shlukováním hydrofóbních (s vodou neinteragujících) skupin se získají nové interakce mezi molekulami vody (kapičky oleje ve vodě se spojí, tím se zmenší jejich celkový povrch) •podobně se chovají hydrofóbní části proteinů (aminokyseliny s nepolárními postranními řetězci se orientují dovnitř prostorové struktury bílkoviny) •v DNA – metylové skupiny thyminu a 5-metyl cytosinu Stacking -interakce mezi paralelně orientovanými páry bazí -překryv p-orbitalů aromatických kruhů (?) -interakce s jinými molekulami (interkalátory, zbytky aromatických aminokyselin při interakcích DNA-protein) Energetická bilance (fyzikálně) chemických procesů, aktivační energie a katalýza