9-Fotometrie


1.

Vypočítejte hodnoty absorbance pro následující hodnoty prošlého světla v % (tj. transmitanci T =
I/I[0] . 100%):

a) 95               b) 88               c) 71                d) 50               e)
17,5             f) 1,0




2.

Isolujete látku A (ε = 5248 při 260 a 3150 při 280 nm) pomocí reagentu B (ε = 311 při 260 a 350 při
280nm). Výsledný preparát má A[260] = 2,50 a A[280] = 2,00.

Jaká je koncentrace A?



3.

Roztok  sloučeniny  A  má A[260] = 0,45 a A[450]= 0,03, roztok  sloučeniny  B má A[260]= 0,04 a
A[450]= 0,81. Směs 2 ml roztoku  A  +  1  ml  roztoku B má A[260 ]= 0,30 a A[450 ]= 0,46.

Existuje interakce mezi A a B?  Jaký předpoklad musí být splněn?



5.

Spektrum bílkoviny bylo snímáno diferenčně v přítomnosti 20% sacharosy a 20% dimetylsulfoxidu.
V sacharose byla absorbance nulová pro všechny vlnové délky, po zahřátí vzorku na 60 ^oC se
objevilo maximum odpovídající Try. Jeho výška odpovídala koncentraci 8 mol Try / mol bílkoviny.
V dimetylsulfoxidu bylo získáno spektrum typické pro Try, po zahřátí na 60 ^oC se výška píku
zdvojnásobila. Co lze říci o struktuře bílkoviny?



6.

Titrujeme bílkovinu louhem.  A[295]  roste s pH, nejostřejší vzestup je při pH 9,6. Při pH 11,7 je
pozorován druhý vzestup, jeho výška je 1/3 prvního. Bílkovina obsahuje v molekule 8 zbytků Tyr. Co
lze říci o struktuře?



7.

Vyisolovali  jste DNA z E. coli. Průměrné zastoupení párů GC je 50%. Denaturační křivka není
hladká, má dva stupně při 80 a 88 ^oC. Výška prvního je 1/4 druhého. Jaké je pravděpodobné
vysvětlení?