MIKROSKOPICKÉ HOUBY – CVIČENÍ V.

1.   Identifikace vláknitých hub rodu Penicillium

Materiál: Petriho misky s kulturou

Pomůcky: preparační jehla, Petriho miska s CYA (Czapek Yeast Autolysate agar), MEA (Malt Extract
Autolysate agar), YES (Yeast Extract Sucrose agar), CREA (agar s kreatinem a  bromkresolovým
purpurem), Ehrlichovo činidlo,


termostat na 25, 5, 37 °C

Pracovní postup:

1.     Povrch příslušných médií inokulujeme konidiemi vláknité houby formou vpichu na třech místech
tvořících vrcholy rovnoramenného trojúhelníka (body mají být vzdáleny asi 3 cm od kraje misky). Aby
se spory při očkování nerozptýlily po celé půdě, očkujeme misky zespoda, otočené dnem vzhůru.

2.      Kultivujeme 1 týden, ve tmě, při teplotě 25, 5, 37 °C.

3.
Hodnocení
CYA 15°C


YES 25°C                                          MEA 25°C                                      CYA
25°C





CYA 37°C


Hodnocení:

po 7 dnech kultivace provedeme vyhodnocení růstu vláknitých hub.

Na CYA, MEA a YES sledujeme:


Znaky makroskopické
  * rychlost růstu

·        charakter povrchu kolonií

·        barvu kolonie

·        barvu spodní strany kolonie

·        přítomnost pigmentu difundujícího do agaru

·        přítomnost a barvu výpotku (exudát)

·        přítomnost zvláštních útvarů viditelných okem (plodničky, sklerocia, aj.)

·        hodnocení růstu a produkce kyselých a zásaditých látek na CREA

·        hodnocení reakce s Ehrlichovým činidlem - ze středu kolonie rostoucí na CYA (staré 5-9
dní) vykrojíme blok agaru. Stranu s kolonií překryjeme čtvercem filtračního papíru o velikosti 1
cm^2 navlhčeného v Ehrlichově činidle. Pokud se po 2-6 min. objeví fialový prstenec označíme reakci
za pozitivní. Pokud se prstenec vytvoří po 10 min. označíme reakci za slabě pozitivní. Některé
druhy produkující alkaloidy, které při reakci s Ehrlichovým činidlem vytvářejí růžový, červený nebo
žlutý prstenec.


Hodnocení na CREA

schopnost využívat kreatin jako zdroj N (růst kultury na agaru)

schopnost tvorby kyselých látek (žluté zbarvení agaru za 5-7 dnů kultivace)

schopnost tvorby zásaditých látek (fialové zbarvení agaru za 8-21 dnů kultivace)

Znaky mikroskopické


Nativní preparát:

Materiál: kultura rodu Penicillium

Pomůcky: podložní a krycí skla, preparační jehly, kyselina mléčná, identifikační protokol

Výsledky :  popíšeme makroskopické a mikroskopické morfologické znaky mikromycety. Zápis provedeme
do přiloženého identifikačního protokolu.

Závěr: podle příslušného klíče provedeme identifikaci.

Charakteristické znaky rodu Penicillium

Charakteristická pro tento rod je štětičkovitá stavba konidioforu (obr. 1). Mimo konidiální stádium
(nepohlavní = anamorfa) se tvoří u některých druhů drobné kulovité plodničky s vřecky (asky) a
askosporami (pohlavní stádium = teleomorfa), které patří do rodu Eupenicillium a Talaromyces. Pro
rozlišení jednotlivých sekcí rodu Penicillium je určující stavba konidioforu (obr. 2) a uspořádání
jeho částí (větví, metul, fialid).

Obr.1




Obr. 2