Mikroskopické houby – cvičení 1 (Bi6620c)
Izolace mikroskopických hub
MASARYKOVA UNIVERZITA
PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA
ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ
http://www.sci.muni.cz/ccm
C:\DATA\Foto\foto mobil\27052015384.jpg

Metody izolace mikroskopických hub
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm

Izolace mikroskopických hub z ovzduší vnitřního prostředí
•člověk je adaptován na existenci mikroorganizmů v ovzduší a jejich vdechnutí zůstává v mnoha
případech bez odezvy.
•alergeny hned za roztoči, prachem a alergeny domácích živočichů
•alergická plicní aspergilóza - způsobená hypersenzitivitou k aspergilovým antigenům při kolonizaci
dolních dýchacích cest aspergily
•produkce mykotoxinů způsobujících mykotoxikózy (především po konzumaci kontaminovaných poživatin).
Mykotoxiny se mohou vyskytovat ve velmi malých koncentracích ve sporách mikroskopických hub, které
je produkují a s nimi být vdechnuty.

Metody izolace mikroskopických hub z ovzduší vnitřního prostředí
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm
http://www.biotech.cz/aktuality/2014/02/aeroskop-spin-air

Princip metody: postupem zkoušení se zjišťuje celková koncentrace všech mikroskopických hub, které
vyrostou na kultivační půdě za daných podmínek aerobní inkubace při 25 ± 1 °C za 3-5 dnů.
Metody s aktivním nasáváním vzduchu
•metody impakční využívají pro průchod vzduchu sací hlavu s otvory, mikroorganismy jsou zachycovány
na agarová média v Petriho miskách (aeroskop)
http://www.biotech.cz/media/img/actuals/actual-spin_air_cap.jpg

Metody izolace mikroskopických hub z ovzduší vnitřního prostředí
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm

Metody s aktivním nasáváním vzduchu
•metody filtrační zachycují mikroorganismy na filtry, které jsou dále vkládány na Petriho misky s
agary (např. Sartorius MD 8)
•metody označované jako impigement využívají pro zachycení mikroorganismů tekutá média či
pohybující se tekutá média (např. Biosampler)
MD8 Airport Portable Air Sampler
https://www.sartorius.com/en/product/product-detail/16757/

Metody izolace mikroskopických hub z ovzduší vnitřního prostředí
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm

Kultivačními půdy a podmínky inkubace dle ČSN ISO 7954
Hodnocení výsledků koncentrací mikroorganismů v ovzduší je prováděno porovnáním s hodnotami dle EUR
14988. Kategorie znečištění ovzduší uvedené v tomto doporučení byly vytvořeny na základě průměrných
naměřených hodnot v ovzduší vnitřního prostředí a nikoli podle odhadu zdravotních rizik.
ČSN ISO 7954 Všeobecné pokyny pro stanovení celkového počtu plísní a kvasinek - Technika počítání
kolonií vykultivovaných při 25 °C
EUR 14988 (Report No. 12: Biological Particles in Indoor Environments, Commission of the European
Communities, Report No. 12, Luxembourg, 1994)

Metody izolace mikroskopických hub z ovzduší vnitřního prostředí
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm

Metody využívající schopnost částic sedimentovat
Princip: Sedimentační (gravitační) metoda využívá schopnost mikroorganismů sedimentovat na pevné
povrchy. Tato metoda by neměla být používána při hodnocení prostor, které využívají oběhový vzduch.
Jedná se o všechny typy klimatizačních zařízení s turbulentním či laminárním prouděním vzduchu.
Hodnocení: Pro pobytové místnosti se považují hodnoty 50 KTJ plísní / Petriho misku / hod. za
hodnoty, které přibližně odpovídají kategorii znečištění střední dle EUR 14988.

Metody izolace mikroskopických hub
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm

* Metoda přímého výsevu - rozložení malého množství vzorku přímo na izolační médium v Petriho misce
* Metoda zřeďovací (dilution plate isolation method– Garrett, 1981; Parkinson et al., 1971) -
ředění se provádí u vzorků s vysokým obsahem mikroorganismů, (např. zeminy, odpadní vody, kaly,
sedimenty, některé potraviny apod.)
* Metoda izolace z osiva – povrchová dezinfekce osiva (chlornan sodný) a následné umístění na
zvlhčený sterilní filtrační papír

Kultivační média
•
•
•
•
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ                 http://www.sci.muni.cz/ccm

Přirozené živné půdy: sterilované a vodou navlhčené řízky brambor, mrkve, rýže, chléb, semena,
lodyhy bylin, bukové špalíky, kukuřičná sláma, obilky pšenice, jehličí, mrtvý hmyz, vlasy...
Polopřirozené živné půdy: sladinkový agar (1000 ml pivovarské sladiny zředěné na polovinu, 20 g
agaru), agar z ovesných vloček (60 g ovesných vloček, 1 l vody, 15 g agaru), bramborovo-mrkvový
agar (20g mrkve a 20 g brambor, nastrouhat, povařit s vodou, doplnit na 1 l, přidat 20 g agaru)
Syntetické živné půdy: Sabouraudův agar, Czapek-Doxův agar...
•při izolaci používáme obvykle selektivní živné půdy, jež nejvíce vyhovují izolovanému druhu houby
•selektivnost podmíněna látkovým složením půdy, teplotou...
•v každém případě je nutno přidat antibakteriální antibiotikum...