ÚLOHA A.

Detekce aktivity askorbát peroxidasy v polyakrylamidovém gelu


Vyhodnoťte prosím po skupinách, abyste vždy měli všechny tři časy (0, 24 a 48h)


- Srovnejte změny aktivity/počet isoforem askorbát peroxidasy po aplikaci cryptogeinu, capsiceinu a
kyseliny salicylové ve srovnání s kontrolou (voda) v závislosti na čase.



ÚLOHA C.

Klonování PCR produktu do plasmidu


- Uveďte celkový počet kolonií po transformaci.

- Uveďte kvantitu a čistotu vyizolované plasmidové DNA.

- Uveďte vypočítané hodnoty koncentrací plasmidové DNA pro jednotlivý počet kopií/μl.



Úloha D.

Stanovení změny exprese genů pro pathogenesis related (PR) proteiny u rostlin tabáku


- Uveďte koncentraci a na základě naměřených dat zhodnoťte čistotu izolované RNA

- Na základě výsledku RealTime PCR vypočítejte metodami absolutní a relativní kvantifikace za
použití delta Ct metody, zdali dochází po přidání cryptogeinu, capsiceinu a k. salicylové ve
sledovaných časových intervalech ke zvýšení transkriptů vybraných PR proteinů a o jak velké zvýšení
se jedná. Výsledek prezentujte ve formě sloupcových grafů. Data pro jednotlivé skupiny máte
v soubourech qPCR_relativni (skupiny 1-6) a qPCR_absolutní (skupiny 7-11).

- Dále na základě vypočtených výsledků porovnejte metodiky relativní a absolutní kvantifikace.



Úloha E

Identifikace jednotlivých druhů Václavek ze vzorku půdy


- Uveďte koncentraci a na základě naměřených dat zhodnoťte čistotu izolované DNA

- Na základě délky amplifikátu a výsledku restrikční analýzy restriktázou HinfI určete, jaký druh
václavky obsahoval váš vzorek půdy, výsledek zdůvodněte.



ÚLOHA F

Exprese a purifikace rekombinantních proteinů


-  Popište výsledek na gelu a okomentujte čistotu proteinu před purifikací (v celkovém lyzátu) a po
purifikaci.

-  Pomocí hmotnostního markeru na gelu a znalosti sekvence pET32a vektoru spočítejte molekulovou
hmotnost exprimované GTPasy. Vynést prosím kalibrační přímku pro odečet molekulové hmotnosti.



ÚLOHA G.

Vliv polymorfismu v genu pro alkoholdehydrogenázu na její aktivitu


- Na základě výsledku restrikční analýzy určete, zda váš vzorek krve obsahoval některý z
polymorfismů v genu pro ADH

- Vypočtěte aktivitu ADH (Ɛ[440] NDMA = 34 . 10^3 M^-1.cm^-1) v kat/ml séra.

Velikost DNA délkového markeru je vždy stejná:

100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000 bp