(I.) Stanovení červeného krevního obrazu (II.) Určení krevní skupiny sklíčkovou metodou Fyziologie I - cvičení Fyziologický ústav LF MU, 2015 © Michal Hendrych Červená krvinka – erytrocyt (ery) • bezjaderná buňka, hlavní část formované složky krve • Tvar: • bikonkávní disk • tvar zvětšuje povrch asi o 30% • zajištuje protein spektrin • Funkce: • transport kyslíku (vázaného především na hemoglobin) do tkání • účastní se na udržení acidobazické rovnováhy a transportu CO2 • Velikost: • Normocyt: 7,5 µm • Mikrocyt: ≤ 7 µm • Makrocyt: ≥ 9 µm • Megalocyt: ≥ 20 µm • Tloušťka cca 2,5 µm na periferii a cca 1 µm ve středu disku Retikulocyt • Prekurzor erytrocytů, fyziologicky tvoří retikulocyty 1% ± 0,5% všech červených krvinek v krvi • Již nemá jádro, ale v cytoplasmě nacházíme zbytky organel (substantia granulo-filamentosa) • Do 48 h dozrává v zralý erytrocyt Počet erytrocytů • Počet ery - RBC (red blood count) • Muž: 4,3-5,3 * 1012 / l • Žena: 3,8-4,8 * 1012 / l • Novorozenec: 4,4-7 *1012 / l • Pohlavní rozdíly: • U mužů: testosteron (mužský pohlavní hormon) stimuluje vyplavení erytropoetinu • U žen ve fertilním věku: relativní erytrocytopenie způsobená pravidelnou ztrátou krve během menstruace Stanovení počtu červených krvinek • Automatické metody • Impedanční – měříme na podkladě nárůstu odporu a poklesu proudu při průchodu kapilárou ze zásobní nádoby do menší nádobky. Ery má nižší vodivost než diluent. Umožnuje nám zjistit i velikost ery, malý = větší proud, velký = nižší proud. • Fotooptická – při průchodu kapilárou na ery dopadá světelný paprsek, ery způsobí rozptyl světla, který zachycujeme • Klasická metoda - Bürkerova komůrka + Hayemův roztok, sloužící k ředění (4950 µl Hayemova roztoku a 25 µl krve….ředění *198, nebo 4975 µl Hayemova roztoku a 25 µl krve….ředění *199) Hematokrit • Vyjadřuje procentuální zastoupení objemu erytrocytů v krvi • Zjišťujeme po centrifugaci nesrážlivé krve* • Plasma • Buffy coat – bílá neprůhledná vrstva nad ery tvořená leukocyty a trombocyty – tvoří pouze 1% objemu krve • Erytrocyty • HCT (hematokrit) • Muž: 42-52% • Žena: 37-47% *centrifugací srážlivé krve po odstranění krevního koagula získáme krevní sérum (od plazmy se liší chyběním koagulačních faktorů) Hemoglobin • HGB (koncentrace hemoglobinu) • Muž: 140-180 g/l • Žena: 120-160 g/l • Novorozenec: 160-240 g/l Stanovení koncentrace hemoglobinu v krvi • Spektrofotometrické stanovení – ke krvi přidáme transformační roztok, který způsobí lýzu ery a uvolnění hemoglobinu, který zároveň přemění na kyanhemoglobin. Stanovujeme absorbanci roztoku. Hemoglobin - deriváty • Oxyhemoglobin – hemoglobin s navázaným O2 • Karboxyhemoglobin – hemoglobin s CO • Karbaminohemoglobin – hemoglobin s CO2 – váže se na N konec řetězce na amino skupinu • Methemoglobin = hemiglobin – Fe3+ • Glykovaný hemoglobin – na řetězec se váže glc – odráží dlouhodobou hladinu cukru v krvi (glykémii) – norma do 4 mmol/l Vypočítané hodnoty červené složky • Objem erytrocytu (MCV, mean corpuscular volume) • MCV = HCT/RBC (hematokrit/ red blood count) = 80-95 fl • Množství hemoglobinu v erytrocytu (MCH, mean corpuscular hemoglobin) • MCH = HGB/RBC (hemoglobin/ red blood count) = 28-32 pg • Koncentrace hemoglobinu v erytrocytu (MCHC, mean corpuscular hemoglobin concentration) • MCHC = HGB/HCT (hemoglobin/ hematokrit) = 310-360 g/l • Distribuční šíře ery (RDW) = 11,5-14,5% • Podává info o variabilitě ve velikosti ery – anizocytóze • ↑RDW – anizocytóza Vypočítané hodnoty červené složky HCT RBC HGB MCH = HGB/RBC MCHC = HGB/HCTMCV = HCT/RBC Anémie • Čili chudokrevnost je nedostatek hemoglobinu v krvi • Projevy • Bledost sliznic, dobře pozorovatelné na konjuktivě • Únava a pokles tělesného výkonu • Tachykardie • Zadýchání se při námaze • Krvinky patří mezi nejrychleji se množící buňky v těle, a proto v krvi nejrychleji pozorujeme změny při poruše nutrice • X polyglobulie = zvýšený počet ery – zvýšená viskozita krve Sideropenická anemie • Způsobená nedostatkem Fe2+ → vede k nedostatečné tvorbě ery → hypoxie tkání stimuluje tvorbu erytropoetinu → zvýšená tvorba erytrocytů s nedostatečným množstvím hemoglobinu • Mikrocytární hypochromní anemie Perniciózní anemie • Nedostatek vitaminu B12 nebo kyseliny listové • Vit. B12 a kyselina listová jsou důležité pro metylaci uracilu na tymin→ ↓tvorba DNA; syntéza RNA a bílkovin neporušena • Makrocytární, hyperchromní anemie Krevní skupiny • Ery na svém povrchu nesou různé antigeny, podle kterých je dělíme do krevních skupin. Tyto krevní znaky se dědí a jsou neměnné během celého života • Např. systémy: ABO, Rh, MNs (průkaz otcovství), Kell, Lewis AB0 systém • Aglutinogeny – glykoproteiny: • 0 – pouze struktura H, alela ii, 33% • A – na strukturu H navázaný N-acetylgalaktosamin, alely AA, Ai, 45% • B – na strukturu H navázaná galaktóza, alely BB, Bi, 16% • AB – nese antigeny A + B, alela AB, 6% • Nevyskytují se jen na ery. • Aglutininy – protilátky IgM: • 0 – anti-A + anti-B • A – anti-B • B – anti-A • AB – nemá • Jejich tvorba je zahájena po příjmu potravy a probíhá po celý život. Nemohou procházet placentární bariérou, přenašeč pouze pro IgG. AB0 systém: dědičnost • Alely: A, B, i • A a B se dědí kodominantně, projeví se obě alely • alela i je vůči nim recesivní Určení krevních skupin sklíčkovou metodou • Sklíčková metoda – na podložní sklíčko kápneme krev a standardní séra skupiny A, B a 0. Dle aglutinace určíme krevní skupinu. Rh faktor • Objeven u druhu Makak rhesus • Antigeny C,c,D,d,E,e • Pokud mám D → Rh+, dominantní • Rh- jsou recesivní homozygoti • Protilátky IgG se tvoří až po setkání a antigenem D • Procházejí placentou • Setkání • Špatná transfuze • Porod Rh- matky Rh+ dítěte, u druhého fetální erytroblastóza – při druhém těhotenství dochází průchodu anti-Rh protilátek placentou a způsobují hemolýzu fetálních erytroblastů→ hydrops fetalis • Prevence: podání anti-Rh séra matce do 2 hodin po porodu