Koncepce předmětu spec. imunolog. metody Bi 9250C, zimní semestr 2016 Časový rozpis blokového cvičení z předmětu Speciální cvičení z imunologie 10 plus 12 studentů, 2h/2kredity Termín: 23.1.-26.1. 017 od 8.30hod 30.1.-2.2. 017 •V praktickém cvičení se budeme zabývat testy sledujícími aktivitu IS •a) bezobratlých •b) obratlovců •Přehled metodik: •Odběr a zpracování krve, příprava séra, stanovení krevního diferenciálu •Imunodifúze – modifikace Manciniová •ELISA - stanovení přítomnosti protilátek proti Borrelia burgdorferi sensu lato, Francisella tularensis, Coxiella burnettii •Test aktivity lymfocytů, ATP test •Test aktivity jaterních buněk, ALT test • •Rychlý kvalitativní test pro stanovení přítomnosti HIV viru Rychlá imunochromatografická metoda stanovení přítomnosti hemoglobinu ve stolici - individuální stanovení Rychlý test ze slin pro odhad hladiny alkoholu v krvi •Rychlá imunochromatografická metoda stanovení přítomnosti H. pylori ve stolici - individuální stanovení •Rychlá imunochromatografická metoda stanovení přítomnosti Staphylococcus pneumoniae v moči •Rychlá imunochromatografická metoda stanovení přítomnosti Staphylococcus pyogenes v hrdle •Pozorování buněk hemolymfy (hemocyty hmyzu), barvení buněk •Test aktivity fagocytózy pomocí škrobových zrn u fagocytů hmyzu, barvení buněk • Průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka (HIT) • • • • • • •Pondělí 8:30 •Instruktáž ke cvičení toho dne, 9.00 postupný odběr krve z prstu, krevní roztěr •příprava destiček na ELISA - Et OH, promývání destiček, zjišťování konc. antigenu, ředění Ag, kalibrační křivka a napipetování na destičku; •Metoda stanovení ALT •v mezičase barvení roztěrů a krevní diferenciál; •ruleta na imunochromatický test •ELISA: 6 destiček a dvě už hotové, Ag už sonifikované, albumin, •Úterý 8:30 •Instruktáž - imunochromatografický test, •ELISA: odstranění Ag a promytí, napipetování vazebného roztoku s kaseinem, inkubace s kaseinem, promytí destiček; v mezičase zpracování krve na sérum, •imunochromatografický test, •Imunodifúze dle Manciniové, Ouchterlony •odběr hemolymfy z larev Zavíječe voskového, kultivace se škrobovými částicemi a sledování fagocytárních schopností hemolymfy, barvení roztěrů a pozorování pod mikroskopem hemocytů, počítání FI a % F, krevní diferenciál - dokončení Pomůcky: •ELISA: blokovací-vazebný roztok s kaseinem, promývací roztok, promývačka •Fagocytóza: Leukodif, roztok škrobových zrn, larvy, sklíčka na roztěry, termostat, malé epiny, pinzety, nůžky, stříkačky a jehly •Pipety, špičky, odpadní nádoba, stojánky, ependorfky, teplotní lázeň, malý termostat •středa 8:30 •Instruktáž. •Test aktivity lymfocytů, ATP test. •Průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka, v mezičase počítání krevní diferenciál, •Pozorování buněk hemolymfy (hemocyty hmyzu), barvení buněk •Test aktivity fagocytózy pomocí škrobových zrn u fagocytů hmyzu, barvení buněk •čtvrtek 8:30 •samotná ELISA, dokončení •ředění sér, rozložení vzorků na destičku, příprava zředěných sér: inkubace destičky se séry (naředit konjugát), promytí destičky, nanesení konjugátu, inkubace s konjugátem (nachystat substrátový roztok s OPD), promytí a nanesení substr. roztoku, inkubace se substrátem, zastavení reakce pomocí H2SO4, měření na ELISA-readeru, v mezičase: krevní diferenciál, FI, % fagocytózy.