Mt DNA Restorase

Reagencie

                             Objem


10x Restorase reaction buffer

                             5

                                  1x

dNTPs Mix

                             8

                                  200 µM/každý

Primer forward

                             1

                                  0,5 µM

Primer reverse

                             1

                                  0,5 µM

DDW

                             24


Restorase

                             1

                                  0,05U/µL

DNA

                             10

                                  1-2 ng

Celkem

                             50


 Primery

Mt DNA region


                                                Sequence of primers

                                                                        Product size

HV1

             F15989

                     HV I/1

                           1a

                                                CCCAAAGCTAAGATTCTAAT

                                                                                                                      165 bp


             R16153*


                           1b

                                                CAGGTGGTCAAGTATTTATGG


             F16097*

                     HV I/2

                           2a

                                                TACATTACTGCCAGCCAC

                                                                                                                      137 bp


             R16233*


                           2b

                                                TGATAGTTGAAGGTTGATTGCTGT


             F16159 *

                     HV I/3

                           3a

                                                CATAAAAACCCAATCCACAT

                                                                                                                      146 bp


             R16304


                           3b

                                                ACTGTTAAGGGTGGGTAGGT


             F16247*

                     HV I/4

                           4a

                                                ACTCCAAAGCCACCCCTCA

                                                                                                                      164 bp


             R16410


                           4b

                                                GAGGATGGTGGTCAAGGGAC


Program 1: Přidání primerů

Preinkubace

                    37 °C

                                      1 hod



                    72 °C

                                      5 min


Iniciační denaturace

                    94 °C

                                      30 sec


Přidání primerů

                    35 °C v termobloku



Denaturace

                    94 °C

                                      30 sec


Annealing

                    56 °C

                                      30 sec

                                                                                            40x

Extenze

                    72°C

                                      30 sec

Finální extenze

                    72 °C

                                      7 min



 1



1

 655A



2

 655A



3

 655A



4

 655A



5

 655B



6

 655B



7

 655B



8

 655B