Fyzikální a chemické prostředky kontroly růstu bakterií Dezinfekce a sterilizace uMikrobicidní x mikrobistatický účinek u uDezinfekce – ničení čí zneškodňování patogenních mikroorganismů na neživých předmětech, ve vnějším prostředí a v infekčním materiálu. Cílem je učinit předměty/prostředí neinfekční uAntisepse – zneškodňování patogenních zárodků v prostředí živých tkání, v ranách, na sliznicích a na kůži. Stačí bakteriostatické působení uAsepse – souhrn opatření vedoucích ke stavu, kdy je v prostředí minimum mikroorganismů. Cílem je zabránit přístupu mikroorganismů k živým tkáním při operacích. Také laboratorní a výrobní metody u nichž je snaha zabránit mikrobiální kontaminaci uSterilizace – zničení všech živých mikroorganismů, včetně spor Antisepse – proti mikrobom vyvolávajucim hnisanie Asepse – napr výroba liekov Fyzikální metody sterilizace uVlhké teplo u přerušovaná sterilizace – varem po dobu 30 min v 18-24h intervalech tři dny po sobě tyndalizace – bílkoviny, ve vodní lázní na 56-58ºC, 30-60 min, 3 dny vodní pára pod tlakem – 100kPa, 120ºC, 20-30 min uSuché teplo u otevřený plamen horkovzdušná sterilizace – sklo, kovy, 160ºC 60 min/180ºC 20 min uFiltrace u slouží k odstranění bakterií z tekutin – azbestové, skleněné, membránové filtry uSterilizace zářením u UV – ideálně 254 nm, germicidní lampy, boxy, operační sály ionizující záření – penetruje, ale nezahřívá předmět, zdroj γ záření je obvykle radioaktivní kobalt Prerusovana – sterilizovaná látka musí byt v medziobdobí uložená při pokojovej teplote, aby spory prezili a mohli vyklíčít a potom sa nicia jako vegetatívne bunky Tyndalizace – pre sterilizáciu termolabilných roztokov bielkovín, čo koagulujú při 60 stupnoch Sterilizace – zničí všetko Suché teplo – menej účinné než autokláv, preto sa robí při vyššej teplote a dlhšie Plamen – klička, ničení kontaminovaných obvazov UV- optimálny baktericidný účinok je při vlnovej dlžke okolo 254 nm, kedy NK maximálne absorbujú žiarenie, na sterilizáciu vzduchu a pracovných ploch Chemické prostředky uKritéria: široké spektrum účinku, nevzniká rezistence, netoxické, rychlé, afinita k MO, inertní k předmětu, stálý účinek za různých podmínek uMechanizmus účinku: přímo poškozují strukturu MO nebo narušují jejich základní metabolické procesy ØZásady a kyseliny ØOxidační prostředky (H2O2) ØSloučeniny halogenů (Chloramin B, jodová tinktura) ØSloučeniny těžkých kovů (Famosept, Thiomersal) ØAlkoholy (etanol, etylenoxid) ØFenolové deriváty (krezoly, Lysol) ØPovrchové aktivní látky (Ajatin, Septonex) Zajímavosti uAntimikrobiální účinek vína, piva a líhovin u„Superbugs“ uDeinococcus radiodurans – přežije 1000 násobní ozáření než jaké zabije lidi uTersicoccus phoenicis – byl na Marsu? uhttp://www.scientificamerican.com/article/bacteria-discovered-spacecraft-clean-rooms/ uhttp://ijs.microbiologyresearch.org/content/journal/ijsem/10.1099/ijs.0.047134-0 uProject PROTECT uhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3371261/ u u https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/b/ba/PIA17369-NASA-Bacteria-TersicoccusPhoenic is-20131106.jpg/250px-PIA17369-NASA-Bacteria-TersicoccusPhoenicis-20131106.jpg http://visitorgoguide.com/crystalcoast/wp-content/uploads/sites/6/2015/03/BeerWine177521527.jpg http://thumbs.dreamstime.com/thumblarge_331/3312732.jpg http://www.esrf.eu/files/live/sites/www/files/UsersAndScience/Experiments/MX/Research_and_Developme nt/Biology/deinococcus_radiodurans2.jpg D. radiodurans T. phoenicis Tersiococcus – zachytený v super čistej miestnosti na rakete v NASA + v uplne inej cistej miestnosti z europskej nasatersi z latiny čistý, fénicus – lebo tá marsová mašinka sa tak volala, nevedia ci ho proste este nezachytili inde, alebo preziva len v super cistých podmienkach, pravdepodobne je len taký málo competitívny, že prežije ked ostatné sú preč , nepreziva dobre v normalnych podmienkach V super cistych mistnostiach su filtry, chemikaliami, potom alkoholom a peroxidom, to cistia, potom este vyssou teplotou, ludia tam chodia od hlavy po paty v oblekoch a prechádzajú cez vzduchovú sprchu Robia to aby ochránili ostatné planéty od mikrobiálneho znečistenia zo zeme + aby si nepomýlili pozemské baktérie s mimozemskými Tiez je projekt PROTECT,kde sa zaujímajú či spóry bacilov by to prežili na Marse, v 2009 vyslali spóry na vesmírnu stanicu, kde ich vystrčili von, a pôsobilo na ne žiarenie, extrémne teploty a vákuum. Väčšina zomrela, ale pár ich prežilo Práce ve cvičení u uTestování účinku vybraných fyzikálních a chemických prostředků pro kontrolu růstu MO u uStanovení účinnosti v závislosti na době kontaktu, koncentraci u u Vliv koncentrace – stanovení minimální inhibiční koncentrace ředící metodou u6 zkumavek (5 na ředící řadu, 1 na kontrolu) uKontrolní zkumavka– jen 2 ml MPB, žádná dezinfekce (kontrola růstu) u uDo první zkumavky roztok v 2 ml MPB: 2% roztok Inciduru(40 µl a 1960 µl bujonu) nebo 3% roztok Sava (60 µl a 1940 µl bujonu) uDo dalších 4 zkumavek napipetovat 1 ml MPB uŘedící řada - z 1. zkumavky odebrat 1 ml a přenést do následující zkumavky, promíchat, odebrat 1 ml a přenést do další zkumavky atd. Z 5. zkumavky odebrat 1 ml a vypustit do odpadu (všude bude 1 ml) u uPoté do všech 6 zkumavek naočkovat 50 µl bakteriální kultury uInkubovat 24h, 37ºC u u Vliv doby kontaktu uDo sterilní zkumavky připravit desinfekční prostředek v koncentraci doporučené výrobcem uIncidur - 0,5%; celkový objem 5 ml: 4 975 μl vody + 25 μl prostředku uSavo – 3,33% roztok (100 ml do 3l), 4834 μl vody + 167 μl Sava uAjatin – 1% roztok: 4950 μl vody + 50 μl Ajatinu u uMisku s MPA rozdělit na 3 části (0 min, 1 min, 10 min) uDo zkumavky s desinfekčním prostředkem ASEPTICKY přidat 500 µl bakteriální kultury. Protřepat. uV časových intervalech 0 min, 1 min a 10 min rozetřít hádka vatovou tyčinkou do příslušných částí misky u uInkubovat 24h na 37ºC Vliv UV záření Pseudomonas fluorescens, Staphylococcus aureus u uVatovou tyčinkou rozetřít kulturu po celém povrchu agaru (4 misky s MPA) uJedna miska se neozařuje a slouží jako kontrola. u3 misky rozdělit na poloviny, umístit do boxu s UV lampou a odklopit víčko. Polovinu misky zakrýt alobalem. uPrvní misku ozařovat 10 s, druhou 30 s a poslední 60 s. uInkubovat 24h, 37 ºC 60 s 20 a 60 s Vliv UV Hodnocení u uVliv doby kontaktu – Porovnat hustotu nárůstu – má/nemá na dezinfekci vliv doba působení? u uVliv koncentrace – Ve které zkumavce (koncentraci) je již znatelný růst? u uVliv UV – Při jaké době ozařování je znatelný úbytek kultury? u