Základní mikrobiologický rozbor vody http://thumbs.dreamstime.com/z/magnifier-bacteria-virus-cells-water-drop-vector-illustration-440386 88.jpg Voda uPřirozené stanoviště bakterií uMnožství a zastoupení závisí na přítomnosti kyslíku a zdrojích uhlíkaté a dusíkaté výživy uVe vodě přítomné bakterie můžeme rozdělit do 3 skupin: uAutochtonní vodní bakterie – typické vodní bakterie uPůdní bakterie – dostávají se do vody splavováním půdy uStřevní bakterie – ze střev člověka a zvířat, jen krátkodobě Strevni – krátkodobo lebo voda pre ne neni vhodným stanovišťom Autochtonní vodní bakterie http://wishart.biology.ualberta.ca/BacMap/includes/species/Chromobacterium_violaceum.png http://i.ytimg.com/vi/0BuVarYDurA/hqdefault.jpg http://imgc.allpostersimages.com/images/P-473-488-90/64/6466/CYNH100Z/posters/david-phillips-microc occus-bacteria-on-agar-micrococcus-is-gram-positive-aerobic-prokaryote.jpg http://images.fineartamerica.com/images-medium-large/sphaerotilus-bacteria-m-i-walker.jpg https://savageimageaward.files.wordpress.com/2011/04/12al1000p.jpg http://images.fineartamerica.com/images-medium-large/spirillum-volutans-eric-v-grave.jpg Chromobacterium Flavobacterium Micrococcus Spirillum Sphaerotillus Leptothrix Spirillum – stojace vody bohaté na org. Látky Chromobacterium violaceum – G-, FAN, kokotyčka, súčasť bežnej vodnej flóry,produkuje prírodné antibiotikum violacein (môže byť vhodné pre liečbu rakoviny), výnimočne napadá ľudí, spôsobuje kožné lézie, abscesy Flavobacterium – G-, tyčka, pôda, voda, niektoré druhy spôsobujú ochorenie rýb Micrococcus – G+, voda, pôda, Sphaerotillus – vodný MO, spájaný so znečistenou vodou, najskôr sa myslelo že to je huba, ale je to filamentózna baktéria Leptothrix – G-, voda, mierne kyselá voda s malými koncentráciami org. Látok, oxiduje železo a mangán a vytvára oranžový precipitát Půdní bakterie http://static1.squarespace.com/static/54e0ac47e4b0541797890fbd/t/55608fdbe4b0767a7f09e409/143239165 8523/ http://imgc.allpostersimages.com/images/P-473-488-90/38/3815/CRQIF00Z/posters/david-phillips-microc occus-bacteria.jpg http://microbiologyglossary.wikispaces.com/file/view/grupa7_streptomyces.jpg/200617020/256x240/grup a7_streptomyces.jpg https://c1.staticflickr.com/1/190/510676658_425afb1323.jpg https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/0/06/Corynebacterium_diphtheriae_Gram_stain.jp g/1280px-Corynebacterium_diphtheriae_Gram_stain.jpg http://i.ytimg.com/vi/l7iwrj3p2l4/hqdefault.jpg Bacillus Micrococcus Corynebacterium Streptomyces Zaskrt 70% antibiotiká Antrax – kožný, pľúcny, črevný (dostane sa do kontaktu s pokožkou, vdýchneš, zješ), maso zo zvieratiek co zjedli spory, Pasteur vyvinul vakcinu Střevní bakterie http://farmamir.ru/wp-content/uploads/2011/11/e-coli-streptococci-300x162.jpg http://i.ytimg.com/vi/rvI_uuyogow/hqdefault.jpg http://img.medscape.com/news/2014/cdc_140520_enterobacteriaceae_800x600.jpg http://i.telegraph.co.uk/multimedia/archive/01899/Enterococcus-faeca_1899715i.jpg https://microbewiki.kenyon.edu/images/thumb/0/0c/SEM_Clostridium_Botulinum.png/400px-SEM_Clostridiu m_Botulinum.png http://cs.stanford.edu/people/eroberts/courses/ww2/projects/chemical-biological-warfare/dysentery_f iles/image002.jpg Enterococcus faecalis Clostridium čeleď Enterobacteriaceae E. coli „Shigella“ Salmonella Sinice = Cyanobacteria uProkaryota, gramnegativní typ buněčné stěny uNejstarší fotosyntetizující organizmy (3,5 miliardy let), u mají tylakoidy, na kterých jsou pigmenty, chlorofyl a fykobiliny uSchopnost přežívat nepříznivé podmínky uVodní květ , toxiny u u http://media.novinky.cz/841/228417-original1-jbplt.jpg http://aa.ecn.cz/img_upload/e6ffb6c50bc1424ab10ecf09e063cd63/vodni_kvet.jpg http://www.sinicearasy.cz/sites/default/files/Cyanobacteria_vlakno.gif http://www.robaid.com/wp-content/gallery/bionics/cyanobacteria.jpg Hrály rozhodující úlohu při vytváraní kyslíkatej atmosféry na zemi Obrovská schopnosř prežívař nepriaznivé podmienky, sú vo všetkých biotopoch, aj v extrémnych Symbiotická teorie – symbiozou vznikli z nich chloroplasty rastlín Premnoženie v znečistených vodách spůsobuje vodný kvet – vo vačšine stojatých vod v ČR, vedia produkovař toxíny – Microcystis, ale tiež sú mnohé jedlé. Cyanobacteria http://ccala.butbn.cas.cz/sites/default/files/styles/ccala_big/public/ccala_collection/13349/135291 9431-121.jpg Nostoc http://thescienceofeating.com/wp-content/uploads/2012/04/Book-Spirulina-e1334610776883.jpg Spirulina http://protist.i.hosei.ac.jp/PDB/images/Prokaryotes/Nostocaceae/Anabaena/sp_05.jpg Anabaena http://protist.i.hosei.ac.jp/pdb/images/Prokaryotes/Chroococcaceae/Chroococcus/turgidus/sp_11.jpg Chroococcus http://planktonnet.awi.de/repository/rawdata-PlanktonNet2/viewable/aalster_and_tzohary_microcystis_ wesenbergii02_lkw_20071008041715_small.jpg Microcystis http://www.cyano-biotech.com/_editor/plugins/ExtendedFileManager/daten/Downloads/Pleurocspsa.jpg Pleurocapsa http://protist.i.hosei.ac.jp/pdb/images/Prokaryotes/Stigonemataceae/sp_1i.jpg Stigonema Hm 11585 1 Znachor Main Chroococcales Nostocales nostoc anabeana Oscillatoriales – spirulina microcystis Pleurocapsales Stigonematales Anabaena – neurotoxin, 1950 sa dostala do pitnej vody, hromadne zomieranie dobytka, USA Moře a oceány uExtrémofilové, tolerance k tlaku, soli, teplotě, součást planktonu http://datavizblog.files.wordpress.com/2013/03/clorea.jpg http://www.da-voda.com/images/cms/thumbs/a5b0aeaa3fa7d6e58d75710c18673bd7ec6d5f6d/watergallery_octo ber2014_slide9_640_435_5_80.jpg http://previews.123rf.com/images/eraxion/eraxion0912/eraxion091200096/6003214-close-up-of-some-isol ated-aeromonas-bacteria-Stock-Photo.jpg Vibrio Aeromonas Marinobacter Vibrio vulnificus v- flesh eating Mikrobiologický rozbor vody uRutinní mikrobiologický rozbor vody nemůže stanovit všechny přítomné mikroorganizmy, ani se neprovádí stanovení všech patogenních mikroorganismů uPro zjištění výskytu závadných bakterií se využívá stanovení tzv. indikátorových skupin bakterií – stanoví se bakterie stejného ekologického charakteru, které lze rychle a jednoduše stanovit uNa indikátorové skupiny jsou zacílené specifické testy uRozeznáváme: Koliformní bakterie, fekální koliformní bakterie, enterokoky, mezofilní bakterie, psychrofilní bakterie, bezbarví bičíkovci a další mrtvé a živé organizmy uPitní voda nesmí obsahovat první tři druhy bakterií Stanovení počtu indikátorů obecného znečistění u1. Psychrofilní bakterie – kultivace při 22 °C uRůstové optimum bakterií – kolem 20 °C uIndikují přítomnost organických látek rychle rozložitelných bakteriemi při nízkých teplotách uStanovují se u pitných vod, u povrchových v případe úpravy vody na pitnou uPouze velmi vysoký počet znamená přítomnost mnoha organických látek ve vodě u u2. Mezofilních bakterií – kultivace při 37 °C uJsou to aerobní bakterie rostoucí při 37 °C uIndikují znečistění mikroflórou teplokrevných živočichů a člověka uJe povolen pouze jejich nízký počet u Stanovení indikátorů fekálního znečistění uIndikátory fekálního znečistění – koliformní bakterie a enterokoky, bakterie vyskytující se ve střevě u uKoliformní bakterie uGramnegativní bakterie z čeledi Enterobacteriaceae uJejich přítomnost je důkazem znečistění fekáliemi uPři kultivaci na selektivně-diagnostických půdách rozkládají laktózu uVětšinou živné média s laktózou uZástupce: Escherichia coli (trávící trakt teplokrevných živočichů), u Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, „Shigella“ uV případe detekce, je třeba rozšířit rozbor o jejich stanovení u Koliformní bakterie - stanovení uEndo agar uSelektivně diagnostické médium uRostou tu jen G- bakterie uBazický fuchsin eliminuje růst G+ uShiffovo reagens indikuje štěpení laktózy uLaktózapozitivní koliformní bakterie rostou tmavorudě, médium také zčervená uLaktóza negativní jsou růžové až průhledné, nezahrnují se do výpočtu u37 °C duben10 002 Koliformní bakterie - stanovení uTeplotní test uPotvrdí čerstvé fekální znečištění uTest při 44 °C na mFC médiu s laktózou uLaktóza pozitivní kolonie budou fialové až tmavomodré, negativní světlerůžové a šedé. http://oh.water.usgs.gov/micro2/images/mfc_method.jpg Enterokoky uFakultativně anaerobní grampozitivní koky, vyskytující se v trávicím traktu člověka a živočichů uOproti koliformním jsou více termorezistentní a odolní vůči vplyvům prostředí uJsou významný indikátor čerstvého fekálního znečištění, především v pitných vodách uEnterococcus faecalis, Enterococcus faecium http://blogs.lt.vt.edu/jcsherry/files/2013/11/bacteria_cartoon.png Enterokoky - stanovení uSelektivní médium pro enterokoky: Slanetz-Bartley agar (azid sodný a tetrazolium chlorid). uPočítáme červené kolonie nebo kolonie s červeným středem, nepočítáme bílé, bezbarevné a kolonie menší než 2 mm. uInkubujeme 48 h při 44 °C, tím odlišíme enterokoky od streptokoků – enterokoky jsou termorezistentní u http://www.labbulletin.com/custom/dev_images/LABM%20JOB%20267_Image.jpg http://www.bio-rad.com/webroot/web/images/fsd/products/water_testing/product_detail/global/tax798_w aterEnterococ_470.jpg Postup ve cvičení uStanovení celkového počtu bakterií (psychrofilních a mezofilních)= obecné znečistění uUniverzální médium TYEA (trypton yeast extract agar) u uStanovení indikátorových skupin bakterií = fekální znečistění uSelektivní média Endův agar, mFC agar, Slanetz-Bartley médium Tyea – dovoluje rast sirokej skale vodnych autochtonnych bakterii, pocitame kolonie jak při plotnovke, vsetky kolonie schopne rastu při 22 a 37 stupnoch. Postup uPitná voda - předpokládáme mnohem nižší zastoupení indikátorových skupin bakterií, proto pracujeme s neředěným vzorkem a s ředěním 10-1 (500 µl a 4500 µl) u8 misek TYEA agar, 4 misky Endo, 4 misky mFC u uPovrchová voda - očekáváme tu více bakterií – pracujeme s ředěním 10-1 a 10-2 u8 misek TYEA agar , 4 misky Endo, 4 misky mFC, 1 miska SB u uPitná voda: (neředěná + ředění 10-1 ) uDo 4 misek (2 misky 22 °C, 2 misky 37 °C) pipetovat 1 ml neředěné vody a zalét TYEA agarem uDo 4 misek (2 misky 22 °C, 2 misky 37 °C) pipetovat 1 ml ředěné vody a zalét TYEA agarem uEndo agar: 100 µl neředěné (2 misky) a 100 µl ředěné (2 misky) vody na agar, rozhokejkovat umFC agar: 100 µl neředěné (2 misky) a 100 µl ředěné (2 misky) vody na agar, rozhokejkovat u uPovrchová voda (10-1 a 10-2 ) uDo 4 misek (2 misky 22 °C, 2 misky 37 °C)napipetovat 1 ml 10-1 vody a zalét TYEA agarem uDo 4 misek (2 misky 22 °C, 2 misky 37 °C)napipetovat 1 ml 10-2 vody a zalét TYEA agarem uEndo agar: 100 µl 10-1 (2 misky) a 100 µl 10-2 (2 misky) vody na agar, rozhokejkovat umFC agar: 100 µl 10-1 (2 misky) a 100 µl 10-2 (2 misky) vody na agar, rozhokejkovat uSB agar: profiltrovat vodu, položit filtr na SB médium u uKultivace: TYEA na 22 °C a 37 °C, Endo 37 °C, mFC 44 °C, SB 44 °C Hodnocení uPočítání kolonií na 1 ml – pozor na přepočet!!! (0,1 x 1 ml na misku!!!) uEnterokoky v pitné vodě přepočítat na 100 ml u uVoda pro hromadné zásobování (více než 100 osob) nesmí uobsahovat více než: u200 psychrofilních a 20 mezofilních bakterií na 1 ml u0 koliformních či enterokoků na 100 ml u uVoda pro individuální zásobování (studny; méně než 100 osob) unesmí obsahovat více než: u500 psychrofilních a 100 mezofilních bakterií na 1 ml u0 koliformních či enterokoků v 10 ml duben10 002 http://www.labbulletin.com/custom/dev_images/LABM%20JOB%20267_Image.jpg TYEA – spočítať všetky kolónie 6c57c3e3cc9c2875848814cedea61491 Endo – počítať tie tmavo červené/tmavo ružové alebo s kovovým leskom, nie svetlo ružové mFC – počítať modré kolónie SB – červené kolónie = enterokoky