Stanovení dehydrogenázové aktivity bakteriálních buněk
24h kultura
2x promýt ve fosfátovém pufru
Naředit (fosf. pufr) na zákal 90% (T=10)
ENDO a EXOgenní aktivita ENDOgenní aktivita
0,5 ml buněk po dvou zkumavkách 0,5 ml buněk
0,15 ml fosf. pufru (2 opakování) 0,4 ml fosf. pufru
0,25 ml substrátu (2)
startuji reakci přidáním 0,1 ml TTC
inkubace při 37oC: 0,10,20,30,40,50‘
zastavení reakce přidáním 2,5 ml 96% etanolu
protřepat, centrifugovat – supernatant do čistých zkumavek
měřím na Spekolu 20 (A485)
Dvojice si rozeberou testované mikroorganismy.
Pro každý pak dělám VŽDY glukózu + další substrát – pro ENDO a EXOgenní aktivitu
plus bez substrátu pro ENDOgenní aktivitu - tedy dohromady 36 zkumavek
Reakce je citlivá na světlo –zakrývat alobalem
Křivka pro EXO a ENDOgenní aktivitu (ug formazabu/mg suš.), dehydrogenázová jednotka pro daný substrát
Odběr na určení sušiny
(2x buňky, 2x pufr – 4ml)