§
METODY FAGOCYTÓZY

- vyšetření zahrnuje:
À krevní diferenciál - % zastoupení LEU
Á izolace LEU
 stanovení funkce LEU

4 skupiny testů na fagocytózu:

test na schopnost fagocytů odpovídat na chemotaktické stimuly /CHTS/
testy na sílu ADHEZE a INGESCE
testy na mikrobicidní aktivitu LEU
testy na metabolickou aktivitu LEU

test na schopnost fagocytů odpovídat na chemotaktické stimuly /CHTS/

·test migrace pod agarózou - postup: nalití agaru na misku a vyřezání otvorů
· plnění otvorů látkami
• kultivace, usmrcení BB, barvení
• odstranění agaru, mikroskopování
•
•princip
•CHEMOTAKTICKÝ STIMUL
•* vnitřní – produkty vlastních BB – komplement, imunokomplex
•* vnější – produkty ze stěn mikrobů – lipopolysacharid, GLP, manan
•
•CHEMOTAKTICKÝ INDEX :
•aktivní pohyb
•difuze
•CHI = A/B >1
•
CHTS
•CHTS
•LEU
•Fyziol. roztok

testy na sílu ADHEZE a INGESCE
•A)test s metakrylátovými částicemi
LEU (popř. krev) + � MSHP /metakrylátové částice/
•
•
•na
•
•· B) test s kadmium-albuminovými částicemi
•
testadaing
•na povrchové receptory fagocytu se naváží MSHP
•necháme kultivovat, barvíme
-počítá se: fagocytární index (FI) a procenta fagocytózy (%F)
•FI = počet fagocytovaných částic /na povrchu, uvnitř/ lomeno počtem
•fagocytujících BB
• %F = počet fagocytujících BB lomeno celkový počet BB krát 100
•
-

•Testy na mikrobicidní aktivitu LEUt
• · test na počet přeživších bakterií
•kultivace
•
BAKTERIE ubytekbakterii
•
•
•
•
-hodnocení:
-* bakterie se vysejí na plotny
•* spektrofotometricky,úbytek zákalu
•· KANDIDATIVNÍ test – test na počet přeživších kvasinek
•LEU+Candida
•Trypanová modř - úbytek kvasinek, mn. přeživších buněk

testy na metabolickou aktivitu LEU
•hodnocení: - pod vlivem CHTS při kultivaci dojde k fagocytóze, jejíž součástí je oxidativní
vzplanutí
-Redukce vlivem oxidačních pochodů v buňce. NBT nitroblue tetrazolium chlorid bezbarvý se změní na
modrý formazán – stanovení SPEKTROFOTOMETREM
-Touto metodou se prokazuje hlavně schopnost fagocytů tvořit kyslíkové radikály aktivací NADPH
oxidázy

•CHEMILUMINISCENČNÍ test
•pro kvantitativní hodnocení oxidativního vzplanutí
•
•
•
•Vznikají elektronově excitované stavy, které emitují fotony. Emitované fotony zachycovány tzv.
luminoforem (luminol, izoluminol nebo lucigenin), spontánní  a aktivovaná CL
•VYUŽITÍ v praxi :
•zjištění : * nedostatečnosti či poruch jednotlivých fází fagocytózy
•* aktivity fagocytů u pacientů s opakovanými infekcemi, opakovanou léčbou antibiotiky, nádorovým
onemocněním, artritidou či revmatoidními onemocněními, při zátěžových situacích
•O2- .  + H2O H2O2  +  O- .  singletový kyslík
•               NADPH
•                oxidáza
•
•O2 + el O2- .
•luminometr