Patogenní kvasinky
Kvasinkové patogeny
Candida Cryptococcus
Malassezia
Trichosporon
Rhodotorula
Hansenula Torulopsis
Geotrichum
Saccharomyces
> 70-90 % onemocnění kvasinkami jsou kandidózy
> počet druhů působících jako etiologické agens a účastnících se patologických procesů u člověka, se zvyšuje _
> Většina kvasinkových druhů je nepatogenní, patogenními se stávají v podmínkách poruch imunitní odpovědi
Přehled onemocnění způsobených patogenními houbami
Asperqilóza (Asperaillus sp.
Blastomvkóza (Blastomvces s
KandidózaíCandida s
Kokcidioidomykóza Krvptokokóza (Crvptococcus sp.
Histoplasmomvkóza (Histoplasma cai
Mukormykóza (Mucor) Paracoccidioidomycosis _ Sporotrichóza (Sporothrix schenckii)
> Mykózy:
• primární
• oportunní (u imunokompromitovaných pacientů - AIDS,
leukémie, diabetes, popáleniny, terapie kortiko-steroidy, imunosupresivy)
• Systémové - plíce, játra, srdce, mozek, slezina
• Lokální - kůže, ústní dutina, vagina aj
> forma a závažnost infekce závisí na: -infekčním agens (druh, množství)
- způsobu a bráně infekce
- stavu imunitního systému hostitele
> endogenní infekce (autoinfekce) zdrojem jsou komenzálové člověka - při porušení homeostázy, vnímavosti a rezistence
> povrchové mykózy - nakažlivé
Některé mykózy mají charakteristickou geografickou distribuci:
Coccidioidomycosis: jihozápad USA a severní Mexiko
Histoplasmosis: jižní oblasti USA Blastomycosis: USA a Afrika Paracoccidioidomycosis: Jižní Amerika Sporotrichosis: Střední Amerika, Mexiko
Diagnostika:
> kombinace  klinického  pozorování a laboratorního vyšetření
> Laboratorní vyšetření:
• mikroskopický průkaz
• kultivační průkaz
• sérologické metody _____
Mikroskopický průkaz
povrchové mykózy - šupinky kůže, části nehtů, seškrab kštice s vlasovými kořínky a kožními šupinami
kandidóza - stery sliznic
systémové infekce - vzorky tkání z více míst ^»=^
přímá mikroskopie:
- ve vlhkých preparátech po natrávení tkáně 10-20% hydroxidem draselným
- infekce sliznic - Gramovo barvení
- morfologie buněk
histologické vyšetření
kultivace
- většina kvasinek snadno kultivovatelná
- Sabouraudův agar
(glukóza, sladinový agar, hydrolyzát kaseinu + chloramfenikol nebo amikacin + vankomycin)
- Czapek - Doksův agar
- současně při 25 - 30°C a 37°C
- doba kultivace 1 - 5 dnů
- kvašení cukrů a další biochemické testy
(identifikační soupravy)
auxanogram - test na asimilaci cukrů a dusíkatých látek (zdroj C) - podle aktivity na barevných substrátech
zymogram - pův. test na zkvašování cukrů , nyní detekce enzymů podle aktivity na uč. Substrátu (na želatině)
Charakteristika kolonií Candida spp. narostlých na CHROMagaru
Barva kolonií Candida albicans zelená Candida tropicalis modrozelená až kovově modrá Candida krusei sametově růžová (chmýřovitá) Candida glabrata růžová, nachová Ostatní druhy bílá až světle fialová
sérologie
Průkaz specifických protilátek:
(protilátková odpověď slabá) - ELISA
Antimykotika:
kvasinky - eukaryontní buňky - běžná antibakteriální antibiotika jsou neúčinná
Terčové struktury antimykotik:
buněčná stěna plasmatická membrána cytoskelet
Antimykotika —> toxický účinek na hostitele)
Přehled antimykotik:
Imidazolová antimykotika
Ovlivňují cytochrom P-450, netvoří se tak ergosterol Zástupci:
Ketokonazol_ - široké antimykotické spektrum (dermatofyty, kandidy, dimorfní houby, indikace:systémové mykózy a vaginální mykózy
Klotrimazol
Triazolová antimykotika Flukonazol
Polyenová antimykotika
váží na ergosterol plasmatické membrány a způsobují perforace plasmatické membrány, působí hlavně na kvasinky a plísně
Zástupci:
Amfotericin B_ - hlavně na kvasinky, plísně a prvoky, Nystatin_ - antimykotikum k lokálnímu užití.
Ostatní systémová antimykotika
Griseofulvin - váže se na mikrotubuly a blokuje mitózu Flucytosin
Allylamine and Morpholine Antifungal Drugs
Allylamines (naftifine, terbinafine) inhibit ergosterol biosynthesis at the level of squalene epoxidase. The morpholine drug, amorolfine, inhibits the same pathway at a later step.
Antimetabolite Antifungal Drugs
5-Fluorocytosine acts as an inhibitor of both DNA and RNA synthesis via the intracytoplasmic_ conversion of 5-fluorocytosine to 5-fluorouracil.
- Příklady antimykotik podle aplikace:
- perorálně: ketokonazol, terbinafin
- parenteral ně:
amfotericin B, mikonazol...
(malá vstřebatelnost z trávicího ústrojí)
- parenterálně i perorálně:
flukonazol, itrakonazol, flucytozin...
existuje primární i získaná rezistence k azolovým sloučeninám
Další příklady antimykotik griseofulvin - proti dermatofytům imidazoly
kyselina nalidixová
fluoropyrimidiny
kandicidin
další látky toxické vůči kvasinkám:
jodid draselný, kyselina boritá, bazická barviva
kombinace antimykotik:
Povrchové mykózy
Povrchová kandidóza:
- postižení kůže, nehtů, sliznic úst a pochvy (infekce sliznic - „moučnivka")
- 80 - 90% Candida albicans, zbývající případy další druhy (C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis, C. glabrata...)
- 20% lidské populace - C. albicans součást komensální flóry pokožky a sliznic
- výskyt závisí na stavu organismu - bakteriální či virová infekce, těhotenství, aj
25°C
Yeast Levures
37°C
Hypha Hyphe
37°C
^71
5
Pseudohyphae Pseudohyphes
Identifikace:
- Sabouraudův glukózový agar - kvasinková fáze (oválné buňky, 3-8 um), kolonie za 1-2 dny při 25°C
- in vivo - směs kvasinkových buněk, pseudomycelia a pravého mycelia
- po obarvení dle Grama: grampozitivní oválné pučící buňky
-Candida albicans - tvorba
charakteristických klíčků (po 90-120 minutách inkubace v séru při 37°C)
- další identifikace: soupravy, testy fermentace a utilizace cukrů a zdrojů dusíku
Léčení:
- lokální terapie nystatinem, amfotericinem B, mikonazolem «
vaginální kandidóza - azolové deriváty, azolové poševní čípky u recidivujících případů
infekce sliznic:
- nejčastější povrchové kandidózy
- na sliznici ohraničené bílé skvrny, mohou splývat a vytvářet pseudomembrány (tvarohový vzhled)
- infekce dutiny ústní:
- bukální sliznice, tvrdé patro, okolí bílých skvrn zarudlé
- kojenci, staré osoby, osoby se sníženou imunitou (AIDS)
- umělý chrup - infekce pod protézou
infekce kůže a nehtů:
- v tříslech, mezi prsty, v podpažní jamce, pod prsy (v místech vlhké zapářky)
- postižení nehtu a nehtového lůžka - při častém máčení rukou (ošetřovatelky, myčky nádobí)
Mykotické plaky na zubech
Původce: většinou Candida albicans, souvislost se stravovacími návyk
Pityriasis versicolor
- chronická infekce způsobená lipofilní Malassezia furfur
- odbarvené skvrny na kůži M. furfur
- běžný komenzál na kůži, většina infekcí je endogenní
- vyžaduje k růstu lipidy; monopolárně pučící (jediný rod)
- oválné lahvovité buňky, velikost 2-3 x 4-6 |jm, při pityriasis versicolor kvasinkovité buňky s krátkými hyfami
- kultivace - speciální půdy s Tweenem nebo lipidy (37°C)
- podílí se na tvorbě lupů a seboroické dermatitíde
Systémové mykózy
Kryptokokóza:
- způsobuje Cryptococcus neoformans
vytvářející hladké lesklé kolonie, kolem buněk silné pouzdro
- onemocnění CNS a plic
- sporadicky po celém světě, nejčastější u pacientů s AIDS (u 10%)
- prostředí - alkalické substráty bohaté na dusík
Průkaz
mikroskopicky: v mozkomíšním moku a dalším klinickém materiálu - kulovité buňky 2-10 um
s mukopolysacharidovým pouzdrem (až 60 % izolátů) - po smíšení mozkomíšního moku s tuší se pouzdro jeví jako jasný dvorec kolem buněk
kultivace: - na Sabouradově agaru při 25-30°C a 37°C za 2-3 dny
- smetanově bílé až žlutohnědé mukózní kolonie (neopouzdřené kmeny - suché)
- netvoří pseudomycelium ani mycelium
- nefermentuje cukry, silná produkce ureázy,
asimilace inozitolu
Blastoschizomyces capitatus
(dříve Trichosporon capitatum)
-diseminované infekce
- oslabení neutropeničtí pacienti se zhoubnými lymfomy
- asimilace pouze glukózy a galaktózy
Geotríchum candidum
- infekce u diabetiků, __
imunosuprimovaných osob
Saccharomyces cerevisiae
- sepse a plieni infekce
původce vaginálních mykóz (8,5 %)
5
Rhodotorula
- barevné kolonie (oranžové, červené)
- neasimiluje inositol
Dimorfní houby
vláknitá fáze
- většinou saprofytická (průnik přes kůži a sliznice)
kvasinková fáze
- infekční (hluboké infekce tkání a orgánů)
- kvasinkový růst podporují bohatější půdy
(krevní agar) a teplota 35-37°C
- tvorba hyf - teplota 25-30°C
Dimorfní patogenní kvasinky		
	Fungus                            In vitro (25° G)                          [n vivo (37ä C)	
	Blastomyces                                               Mů|íJ C^^^ CocCidioides             "^^^                                                       ^^^^^ Spherule	
	Histoptesmv                        ^Z^^^^j Mold                    C^X^ Y^ Paracoccidioides                         ^__Mokr              ^"íá"1' Vea&t	
	Sporothrix CZ^^	
Blastomykóza, kokcidiomykža, sporotrichóza etc.		
Sporothrix schenckii
buňky ve fázovém kontrastu - hyfy a konídie
Sporothrix schenckii
studie buněk freeze fracture technikou
F*
•M
v- m
\    i s
Sporothrix schenckii
Candida albicans
studium vlivu antibiotika nystatinu na morfologii plasmatické membrány
Genová kontrola morfogeneze u C. albicans
HSGíä
T T T
PsauííoHYťiftae
Run
Njiíuro Royiows I Genetics
Role Ca++ v morfogenezi Candida albicans
Localized Ca2+-channel activation caused by localized changes in membrane potential or membrane stretch, results in calcium influx that directs polarized growth
Blastomyces dermatitis