Příprava krevního séra z lidské krve


Teorie:

Krevní sérum se získává z krve ke kvantitativnímu a kvalitativnímu stanovení různých látek
nacházejících se v séru a charakterizujících současný zdravotní stav jedince (např. stanovení
imunoglobulinů, C-reaktivního proteinu a dalších proteinů akutní fáze, složek komplementu,
autoprotilátek proti vlastním tkáním, protilátek proti mikroorganismům, hormonům atd).


Úkol:

Příprava lidského séra z krve pro další zpracování ke kvantitativnímu a kvalitativnímu stanovení
různých látek, špachtličky na odlepení krev. koláče, fotky buněk, vzor


Pomůcky:

Ajatin - desinfekce, rukavice, sterilní bodce, mikropipety a špičky, eppendorfky, štítky,
popisovač, centrifuga.


Postup práce:

Šetrně a v rukavicích odebereme sterilně krev z prstu do eppendorfky, označíme štítkem a dáme do
ledničky do druhého dne. Další den opatrně pomocí špachtličky odlepíme krevní koláč z epiny, pak
stočíme na centrifuze do 1500 otáček/min asi 5 - 10 minut, odebereme žlutavou tekutinu (tj. sérum,
vyloučené na povrch vzniklého krevného koláče a krevní sraženiny), přemístíme do další eppendorfky,
označíme štítkem a zamrazíme pro použití na další cvičení.


         Krevní diferenciál leukocytů

Úkol: zjištění krevního diferenciálu u lidské krve a fotka či obrázek tří zástupců bílých krvinek


Pomůcky: kyvety na barvení, barvící souprava Leukodif (Biolatest), podložní skla, rukavice, alkohol
na čištění skel, krevní roztěr, mikroskop, objektiv pro pozorování pod imerzí, olej nebo glycerol


Provedení: Krevní roztěr nabarvíme barvící soupravou Leukodif podle instrukcí. Pak podle schematu
prohlížíme krevní nátěr a zjištěné počty leukocytů zapisujeme do tabulky. Po zapsání 100 leukocytů
sečteme jednotlivé sloupce a zjistíme tak procentuální zastoupení jednotlivých druhů leukocytů.
V preparátu krevního roztěru se nachází následující krevní elementy: červené (erytrocyty) a bílé
(leukocyty) krvinky, a krevní destičky (trombocyty).

Leukocyty dělíme na granulocyty (nezralý neutrofil – tyčka, neutrofil, eozinofil, bazofil) a
agranulocyty (monocyt, lymfocyt).

U zdravého jedince by měl být výsledek následující:

          leukocyty


tyčka (nezralý neutrofil)

                                1-2 %

neutrofil

                              55-60 %

eozinofil

                                2-3 %

bazofil

                                0,5 %

monocyt

                                5-7 %

lymfocyt

                              30-40 %


Zjištěné počty buněk se zapisují do speciální tabulky (viz dále).

                     neutrofil

                              tyčka

                                   lymfocyt

                                           monocyt

                                                  eosinofil

                                                           bazofil

                                                                  neznámý

                                                                         suma








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         10








                                                                         100






Počítání bílých krvinek se provádí posunováním zorných polí podle tohoto obrázku

Krevní diferenciál se stanovuje při běžném vyšetření zdravotního stavu člověka. Změny v počtu
bílých krvinek totiž mohou předznamenávat řadu krevních a jiných chorob, pro které jsou tyto  změny
typické.

Barvení Leucodif

Další typ barvení

Barvení podle Pappenheima v kyvetách:

3 min. fixace v kyvetě s metylalkoholem

3 min. May - Grunwald  1:1 s vodou (lépe 2 min.)

15 min. Giemsa - Romanowski  1:9 s vodou

opláchnout ve vodě, nechat schnout

pozn. sklíčka vkládat rubem k sobě do 1 drážky






Leukocyty:

eozionofil

  http://www.muhteva.com/resimler/resimler/Bazofil-Nedir--165-1.gif      bazofil

http://www.wikiskripta.eu/images/thumb/0/05/Neutrophil2.jpg/180px-Neutrophil2.jpg  neutrofil

http://t2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcT2TU-Ue5zHMJLABaQiRyGDNNlludW1KfoHOvooHpxgyTyRrw5hXQ tyčka
neutrofil, monocyt

http://old.lf3.cuni.cz/histologie/atlas/demo/73/img00018.jpg  lymfocyt

Zdroje:
http://www.google.cz/search?tbm=isch&hl=cs&source=hp&biw=1280&bih=571&q=bazofil&gbv=2&oq=bazofil&aq
=f&aqi=g3gS7&aql=&gs_sm=s&gs_upl=1328l4406l0l6172l7l7l0l1l1l0l78l328l6l6l0#hl=cs&gbv=2&tbm=isch&sa=
1&q=neutrofil&oq=neutro