1 Krátké poznámky k chemometrii v klinické biochemii 1 Zavádění a výběr nových metod •  Od 7.12.2005 smí laboratoř používat pouze produkty se značkou CE (Evropská unie) •  Výrobce zaručuje, že výrobek splňuje direktivu IVD 98/79 EC, tj. požadavky na zdravotnické prostředky in vitro •  Výrobek je validovaný a má mít metrologickou návaznost hodnot kalibrátorů a kontrolních přípravků 2 NÁVAZNOST provázání rutinních měření s referenčními metodami a referenčními materiály Jak ji můžeme zjistit? → rozborem dokumentace výrobce 3 •  Realizace návaznosti v klinické laboratoři je velmi obtížná •  U biologických analytů je k dispozici jen asi v 10 - 20% případech referenční materiál/ referenční metoda měření 4 Validace vs verifikace •  VALIDACE -splnění požadavků na měřící postup s ohledem na jeho zamýšlené použití -důkaz ve formě dokumentace, že metoda bude poskytovat výsledky odpovídající předem určené specifikaci •  VERIFIKACE -potvrzení, že laboratoř je schopná validovaný měřící postup správně provádět 5 Kdo validuje? •  Výrobce diagnostik (direktiva IVD 98/79 EC) •  Případně i laboratoř ( je to obtížné) 6 2 Co se validuje a verifikuje? •  Přesnost a správnost •  Pracovní rozsah/ linearita •  Citlivost (mez detekce/ stanovitelnosti) •  Interference •  Robusnost •  Porovnání s jinou metodou Při verifikaci jen ověřujeme, že jsme v laboratoři schopni dodržovat uvedené analytické znaky metody 7 9 PŘESNOST Je to míra shody mezi výsledky získanými opakovanou analýzou téhož vzorku za předem stanovených podmínek •  OPAKOVATELNOST •  REPRODUKOVATELNOST •  aritmetický průměr(x), směrodatná odchylka(SD), variační koeficient(CV) 10 SPRÁVNOST (BIAS) Je to míra shody mezi výsledkem měření a skutečnou hodnotou •  absolutní chyba, relativní chyba 11 •  Nejistota = kombinace náhodné a systematické chyby •  Normy řízení kvality ukládají každé laboratoři vyhodnotit nejistoty svých měření 22 NEJISTOTA (Uncertainty) •  Je to údaj, který charakterizuje rozsah, v němž se výsledek měření odůvodněně nachází. •  Nejistota umožňuje realistickou interpretaci výsledků měření pro diagnostické klasifikace a pro kontrolu terapie chorobných procesů •  x = (X ±U) x = skutečný výsledek X = hodnota analytu U = nejistota 23 3 Standardní nejistoty 1) Náhodná složka (typ A) - zjistíme pomocí programu vnitřní kontroly kvality jako směrodatnou odchylku reprodukovatelnost měření (Cva) 2) Systematická složka (typ B) – nejistota kalibrační hodnoty vyjádřená jako směrodatná odchylka (CVkal) Kombinované nejistoty (Uc) Obvykle se rozšíří na 95% interval spolehlivosti (vynásobením faktorem překrytí k=2) 24 Příklad vyhodnocení nejistoty měření glukózy •  Dlouhodobá přesnost měření glukózy je 2,1 %. Tato hodnota ukazuje stabilitu měření – kolísání vlivem reagencií, kolísání činnosti analyzátoru. •  Nejistotu kalibrace může laboratoř vyhodnotit přímo z údaje o nejistotě hodnoty kalibrátoru. V kalibrátoru je uvedena nejistota hodnoty kalibrátoru u glukózy 1,2 % 27 Výpočet ulab = 2 x (CVa2 + CVkal2)1/2 = 2 x (2,12 + 1,22)1/2 = 2 x (4,41 + 1,44)1/2 = 2 x (5,85)1/2 = 2,42% Ulab = 2 x ulab = 2 x 2,42 = 4,84 % •  Laboratorní nejistota měření glukózy je v tomto případě 4,84 %. 28 •  To znamená, že v laboratoři je např.výsledek glukózy 7,0 mmol/ (rozhodovací limit mezi přítomností a nepřítomností diabetu) ve skutečnosti 7,0 ± 4,84 % = 7,0 ±0,34 mmol/l •  Klasifikace nepřítomnosti diabetu je jistá až při hodnotě nižší než 6,66 mmol/l a klasifikace přítomnosti diabetu je jistá až při hodnotě vyšší než 7,34 mmol/l 29 Další chemometrické postupy používané v klinické biochemii •  stanovení referenčních hodnot/intervalů, rozhodovacích kritérií (cut-off) •  pravděpodobnost určení diagnózy pomocí laboratorního testu (klinická sensitivita a specifita, ROC, prediktivní hodnoty,…) •  plánování experimentů •  statistické testování, multivariační analýza,… 30