Anémie Bourková L., OKH FN Brno Sledování vyšetření •Sledovat: •hloubku anémie v KO •morfologické změny erytrocytů v periferní krvi (barevné, tvarové, inkluze) •morfologické a množstevní změny erytrocytární populace v KD • Vyšetření retikulocytů •Barvení RNA v erytrocytech: •mikroskopicky –supravitální barvení (bez fixace preparátu) •analyzátorem –analýza prošlého a odraženého světla –analýza fluorescence Mikroskopické vyšetření retikulocytů •V retikulocytech se barví supravitálně brillantcresylovou modří zbytky RNA. •Pozitivita se hodnotí v 1000 erytrocytech –normální hodnoty: 0,5 – 2,5 % Vyšetření retikulocytů na analyzátoru •analýza prošlého a odraženého světla probíhá v retikulocytech na precipitovaných, obarvených síťových strukturách RNA •fluorescenční analýza vlákna RNA jsou obarvena fluorescenčními barvami, množství RNA je úměrné intenzitě fluorescence •Normální hodnoty: 0,5 – 2,5 % 25 – 75 x 109/L Cytochemické vyšetření zásobního Fe •Zásobní (nehemové) železo ve formě Fe3+ §v erytrocytech §NRBC §makrofázích •Princip: Fe3+ tvoří s ferrokyanidem draselným a kyselinou chlorovodíkovou barevný komplex – berlínskou modř •Hodnocení: zelenomodrá granula §v erytrocytech (siderocyty) §v NRBC (sideroblasty) §zrnka v NRBC okolo 2/3 jádra (prstenčité sideroblasty) §v makrofázích (siderofágy) •Normální hodnoty: 20 – 60 % pozitivních NRBC 2 - 4 siderofágy ze 6 nalezených makrofágů •Klinický význam: anémie §např.: sideropenické (nízké hodnoty) §sideroblastické (přítomné prstenčité sideroblasty, zvýšené zásobní Fe) §hemolytické anémie (vysoké hodnoty) §refrakterní anémie (vysoké hodnoty) Barvení Fe 3+ Fe-makrofágy Fe-ring Fe-zásobní prstenčitý sideroblast siderofágy Barvení Fe 3+ Fe-nrbc2 Fe-nrbc3 Fe-nrbc4 Fe-nrbc5 Fe-nrbc6 Fe-nrbc7 Porucha syntézy hemu •Sideropenická anémie •(nedostatek železa) •KO: pokles HGB, MCV, vyšší RDW, vyšší PLT, lehce vyšší Retic •nátěr PK: hypochromní mikrocyty, anulocyty, poikilocyty, bazofilní tečkování •nátěr KD: vyšší erytropoéza, NRBC - opožděné vyzrávání cytoplazmy, vyšetřování zásobního Fe (hodnoty snížené nebo nulové) hem-PK4_ery-1000x hem-PK1_ery-1000x hem-PK6_ery-nedostatek Fe Sideropenická anémie Porucha syntézy globinu •Thalasemie •KO: nižší nebo normál. RBC, nižší nebo normál. HGB, výrazně snížené MCV, vyšší RDW, lehce vyšší WBC, lehce vyšší PLT, zvýšený Hgb F (až nad 30%) •nátěr PK: mikrocytóza, hypochromie, terčovité ery, polychromázie, bazofilní tečkování, H.J.tělíska, bazofilní tečkování, NRBC, mladší formy WBC •nátěr KD: hyperplazie erytropoézy, vyšetření zásobního Fe (hodnoty zvýšené) Thalasemie thalasemia Porucha syntézy DNA •Megaloblastové anémie •KO: MCV >100fl, HGB až pod 50g/L, vyšší RDW, snížení WBC, NE, PLT •nátěr PK: makroovalocytóza, poikilocytóza, Cabotovy prstence, bazofilní tečkování, H.J. tělíska, NRBC, NE - hypersegmentace, větší buňky, větší laločnatost jader i u monocytů, velké až gigantické PLT •nátěr KD: buněčně bohatá, erytropoéza zmnožená, posun k mladším formám, (megaloblastová přestavba ve všech vývojových řadách), velké tyče, metamyelocyty, hypersegmentace MGK, vyšetření zásobního Fe (hodnoty zvýšené) NRBC Megaloblasty NRBC X Megaloblast Megaloblastová anémie megaloblastic_anemie2 megaloblastic_anemie7 Megaloblastová anémie megaloblastic_anemie11 megaloblastic_anemie12 megaloblastic_anemie13 megakaryocyt Aplastické anémie - dřeňový útlum •porucha kmenové (mateřské) buňky •periferní krev: pancytopenie nebo alespoň anemie a trombocytopenie, mírná makrocytóza a anizocytóza •kostní dřeň: obvykle hypoplastická až aplastická Výsledek obrázku pro aplastic anemia Aplastické anémie KD Dysplastické anémie •dysplázie erytropoézy: porucha vyzrávání, morfologické abnormality §periferní krev: makrocytóza, anizocytóza,poikilocytóza, §kostní dřeň: často megaloidní rysy, vícejaderné NRBC, karyorexe, interplazmatické můstky, mitózy, bývají zvýšené zásoby Fe Anemie ze zvýšené ztráty erytrocytů •Sledovat: •KO a morfologické změny v periferní krvi •změny v KD •vyšetření na HA • Vyšetření na hemolytické anémie (HA) •např.: •volný hemoglobin v plazmě §základní metodika pro vyšetřování hemolýzy v plazmě ühaptoglobin üferitin üelektroforéza hemoglobinu • •Speciální vyšetření: •osmotická rezistence •hemosiderin v moči •hemoglobin F •Heinzova tělíska •autohemolýza Princip základní metodiky •Volný hemoglobin v plazmě Volný hemoglobin Hb(Fe2+) v plazmě je stanoven fotometricky po jeho oxidaci na hemiglobin (Fe3+) a ten se potom pomocí kyanidu (CN-) draselného přemění na barevný komplex hemiglobinkyanidu, stanovitelný fotometricky. Osmotická rezistence •Princip Stanovení odolnosti erytrocytů vůči různě koncentrovaným hypotonickým roztokům NaCl v koncentracích od 0,70 % do 0,22 % (odstupňované po 0,02 %). Jestliže jsou erytrocyty v isotonickém roztoku 0,9% NaCl, dochází na membráně buňky k rovnovážnému stavu a kapalina se nedostává ani z buňky ani do buňky. Jestliže jsou erytrocyty umístěny v prostředí hypotonického roztoku (0,70 - 0,22 % NaCl) tak buďto prasknou a dojde k hemolýze nebo se vytvoří na membráně rovnováha. • Osmotická rezistence osmot-rez1 osmot-rez2 normál patologie příprava Hemosiderin v moči •Princip Fe3+ v hemosiderinu reaguje s kyselým roztokem ferrokyanidu draselného na ferrokyanid železitý, který vytváří krystalky berlínské modři. •Hodnocení přítomnost modrých krystalů v moči –normální nález: negativní –pozitivní nález: + až +++ Hemosiderin v moči hemosiderin v moči Hemoglobin F •Princip Nafixované, zaschlé nátěry se ponoří do pufru pH 3.3. Hemoglobin A (adult hemoglobin) je v buňce rozpuštěn a vyplaven, hemoglobin F (fetální hemoglobin) je ke kyselému prostředí rezistentní a v erytrocytu zůstává. Zbylý hemoglobin F se potom barví a odečítá mikroskopicky. •Hodnocení procentuelní hodnocení sytě zbarvených erytrocytů §novorozenci: 50 - 90 % HbF §věk < 2 roky: 0 - 4 % HbF §věk > 2 roky: 0 - 2 % HbF Hemoglobin F HGB-F Heinzova tělíska •Princip Heinzova tělíska znázorňují vysrážený degenerovaný hemoglobin v případě, že glykolytické enzymy erytrocytů nejsou schopny zabránit oxidaci hemoglobinové molekuly. Precipitáty se jeví jako jedno nebo více oválných tělísek v erytrocytech. Objevují se těsně u buněčné membrány, ke které přiléhají, barví se supravitálně brillantcresylovou modří. •Hodnocení normalní erytrocyty jsou negativní •Klinický význam enzymové defekty (např.G-6-PDH), hemoglobinopatie, toxické HA, po splenektomii Heinzova tělíska Heinz1 Heinz2 Výsledek obrázku pro heinz bodies Výsledek obrázku pro heinz bodies and bite cells Heinzova tělíska Výsledek obrázku pro heinz bodies and bite cells [USEMAP] bite cells bite cells Vyšetření HA •Fotometrická vyšetření na principu stanovení volného hemoglobinu v plazmě. •Autohemolýza Hodnocení spontánní hemolýzy v prostředí fyziologického roztoku, glukózy a ATP po dobu 48 hodin. Podpořeno MZ ČR – RVO (FNBr, 65269705)