1.Krevní obraz 2.Krevní systémy AB0, Rh factor, HLA 3.Srážení krve Krev (Haima, Sanquis) — https://euc-powerpoint.officeapps.live.com/pods/GetClipboardImage.ashx?Id=9161a006-8e15-4d00-8b3e-f 638e4a2d985&DC=GEU4&wdoverrides=GetClipboardImageEnabled:true Hlavní funkce krve 1.Výměna O2 a CO2 2.Výměna živin a odpadních látek 3.Transport – hormony, sekretované působky 4.Termoregulace 5.Pufrovací kapacita (pH, osmotický tlak) 6.Imunitní funkce 7.Udržování a řízení krevního tlaku Hematopoéza —Původ hematopoetický kmenových buněk: —Žloutkový váček —Vznik krevních elementů: —Kostní dřeň —Zánik: —Slezina —Celkové množství krve: —4,5 – 6 l krve (h.s.s.) Schematic representation of hematopoiesis in which pluripotent ... https://www.researchgate.net/figure/Schematic-representation-of-hematopoiesis-in-which-pluripotent- stem-and-progenitor-cells_fig1_51097595 Krevní obraz (K.O.) Stanovuje počet a charakter krevních elementů Červené krvinky Bílé krvinky Hemoglobin Hematokrit 4,3 - 5,3.106/ml 4 - 9.103/ml 14 – 18g/100ml 0,39 – 0,49 3,8 – 4,8.106/ml 12 – 16g/100ml 0,35 – 0,43 Bűrkerova komůrka 1/10mm 1/5 mm 1/20 mm Pravidlo 2 stran: Erytrocyty 4,3 - 5,3.106/ml 3,8 – 4,8.106/ml Přenos dýchacích plynů (hemoglobin) Životnost : 100 – 120 dní DETEKCE: HAYEMŮV roztok – 1:200 (síran sodný, chlorid sodný, chlorid rtuťnatý) Počítá se 20 obdélníků S = 1/100 mm2 Bílé krvinky — Neutrofily … fagocytóza — Granulocyty Eosinofily … x parazitům, alergie —Leukocyty Bazofily … žírné b., alergie, heparin, histamin — Agranulocyty — Monocyty … fagocytóza — Lymfocyty … specifické im. r. 4 - 9.103/ml Životnost: několik dní DETEKCE: TŰRCKŮV roztok – 1:20 (kys. octová, genciánová violeť) Počítat cca 50 čtverců S = 1/25 mm2 Každý 4 čtverečky Počet krvinek v 1 ml krve —erytrocyty leukocyty —Počet krvinek v 1 ml krve = p. č. h. z — y — —p… napočítané krvinky (suma) —č… reciproká hodnota plochy políčka (100/25) —h… reciproká hodnota výšky komůrky (10) —z… ředění krve (200/20) —y… počet políček y http://scientificbeekeeping.com/scibeeimages/sickbees12-hemacytometer.jpg Úkol do protokolu: Bílé krvinky, spočítat 20 čtverců, pozor na pravidlo 2 stran! Hemoglobin 14 – 18g/100ml 12 – 16g/100ml Funkce: Přenos dýchacích plynů Pufrovací kapacita krve Hemolýza: Globin – rozštěpen na aminokyseliny Hem – Fe3+ - transferin – hemosiderin – feritin - biliverdin – bilirubin - žluč DETEKCE: Dříve (cvičení) Sahliho hemometr (vizuální kolorimetr) Kapka 0,1 M HCl + 20 ml krve = kyselý (hnědý) chlorhemin Dnes (biochem. laboratoř) Hemoglobin – methemoglobin – kyanmethemoglobin Spektrofotometr (540 nm) Oxidace hemoglobinu na methemoglobin: HbFe^II+ [Fe^III(CN)[6]]^3− → HbFe^III+ [Fe^II(CN)[6]]^4−[HemoglobinMethemoglobin]Přeměna methemoglobinu na kyanmethemoglobin: HbFe^III+ CN^− → HbFe^IIICN[MethemoglobinKyanmethemoglobin]Fotometrické stanovení je založeno na oxidaci dvojmocného železa v hemoglobinu hexakyanoželezitanem draselným na trojmocné železo. Vzniklý methemoglobin se v další reakci s kyanidem draselným přeměňuje na velmi stálý kyanmethemoglobin s jediným širokým absorpčním maximem ve viditelné oblasti při 540 nm. Hodnocení: Referenční rozmezí koncentrace hemoglobinu v krvi(B hemoglobin)pro dospělého muže je 130–180 g/l a pro ženu 120–160 g/l. Poměr objemu červených krvinek ku celkovému objemu krve DETEKCE: Heparinovaná zkumavka Centrifugace 3 min / 12 000 RPM 0,39 – 0,49 0,35 – 0,43 Hematokrit fibrinogen Patologie krevních elementů — Erytrocyty - anémie (oligocytémie,erytrocytopénie) — - polyglobulie — — Leukocyty - leukopénie (x leukémie) — - leukocytóza — — Hemoglobin - anémie (norm. počet erytrocytů) — —Norm. hemoglobin i počet ERY + špatná afinita dých. plynů - anémie Úkol v protokolu: Podle hodnot krevního obrazu identifikujte anemické pacienty + příčinu anemie Sedimentace Stojan pro sedimentaci pro 10 zkumavek •Rychlost spotnátnního klesání červených krvinek ve zkoumaném vzorku krve, umístěném ve zkumavce •Měřeno po 1 a 2 hodinách • •Norma: ženy 5-12 mm/hod, muži 3-8 mm/hod • • Zvýšená sedimentace: zánět (zvýšení koncentrace Ig, fibrinogenu, CRP) anemie, menstruace, těhotenství, rakovina, infarkt Snížená sedimentace: plicní a srdeční onemocnění (srdeční selhání), alergie Úloha: Fyzio Srážení krve anti-trombin ˇ ˇ ˇ ˇ ˇ ˇ ˇ ˇ Protisrážlivé látky —Heparin – vazba na antitrombin III, inhibice aktivace trombinu — —Hirudin – taktéž antitrombinový efekt — —Soli kyseliny šťavelové a citronové (vážou vápník) — —Ixodin – inhibitor trombokinázy — —Kumarin (warfarin) – inhibitor syntézy faktorů závislých na vit. K (VII, IX, X, II) — http://www.zoologie.upol.cz/hemat2.htm Krevní systémy —Imunohematologie — —Antigen = aglutinogen —(protein(glykan) na povrchu buněk) —Protilátka = aglutinin —(protein produkovaný B-lymfocyty) — Aglutinogen + aglutinin = aglutinace Ag Ab shlukování Vazba antigen - protilátka > Vazba mezi Ag a Ab: Nekovalentní vazba Iontové síly Van der Vaalsovy síly Vodíkové můstky Ab - - - - + ++ + - + - - + ++ - - - + - + + - - - + - + - Systém ABO (sklíčková metoda) — ČR 41% 14% 7% 38% — eskymáci JV Asie indiáni, afričané Anti A anti B 0 A B AB Úkol v protokolu: stanovení krevní skupiny Antigeny systému ABO 1.1901 Landsteiner (A,B,0), 1907 Jánský (A,B,O,AB) 2.A,B antigeny jsou běžné u všech mikroorganizmů ERYTROCYT glykosfingolipid/ glykoprotein Fukóza N-acetylglukosamin galaktóza N-acetylgalaktosamin Skupina A Skupina B H antigen = skupina 0 (Bombajský antigen = h) Klonální selekce 1.Hematopoetická kmenová buňka 2.Nezralé B lymfocyty s různými Ag R 3.Ty, které reagují s tělními Ag jsou negativně selektovány 4.Ostatní klony dozrávají a 5.reagují s cizorodými Ag – aktivují se 6.a proliferují 7. — Ty, které se nepotkají se „svým“ Ag, jsou zastaveny ve vývoji a cirkulují v těle Clonal selection of lymphocytes: 1) A hematopoietic stem cell undergoes differentiation and genetic rearrangement to produce 2) immature lymphocytes with many different antigen receptors. Those that bind to 3) antigens from the body's own tissues are destroyed, while the rest mature into 4) inactive lymphocytes. Most of these will never encounter a matching 5) foreign antigen, but those that do are activated and produce 6) many clones of themselves. Princip odstranění auto-imunitních klonů B-lymfocytů Rh faktor (zkumavková metoda) —1940 - Landsteiner — - imunizoval králíky krví Macacus Rhesus — - v krvi nejsou běžně protilátky — - Rh inkompatibilita — — Genotyp Fenotyp —CcDdEe - D - Rh+ … 85% — - d - Rh- … 15% —DETEKCE: 500 ml fyziolog. roztoku + 10 ml krve — Centrifugace +100 ml fyziol. roztoku —1 kapka anti-D séra + 1 kapka erytrocytů, 10´/RT - Centrifugace Úkol v protokolu: stanovení krevní skupiny Další krevní systémy ÒMN systém (Ss), P systém, Lewis, Duffy ÒHLA systém (leukocyty) – 60. léta (10 Ag) ÒPo vazbě Ag jsou vystaveny na membráně ÒT-lymfocyty testují, zda je Ag cizí nebo vlastní — — — —Transfúze – AB0, Rh (křížový test) — — — —Transplantace – AB0, Rh + — srdce+játra - přihlíží se k HLA — ledviny - víc se přihlíží k HLA — k. dřeň - shoda ve všech testovaných HLA