1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif 1212570_28446780.jpg logo_mu_cerne.gif Luděk Bláha, PřF MU, RECETOX www.recetox.cz Správná laboratorní praxe - poznámky biologické/toxikologické - OPVK_MU_stred_2 http://roiunlimited.files.wordpress.com/2011/04/saturado.jpg SLP – Spousta Listů Papíru GLP - Give me a Lot of Papers 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Pojmy a vyjasnění na začátku (follow-up přednášek B. Vrana) •Co znamená pojem kvalita? (kvalita informace, výsledku)? •Co je to QA/QC? •Co je to standardizace? •Co je to validace? •Co je to akreditace? •Co je to správná laboratorní praxe? 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif http://navier.engr.colostate.edu/whatische/images/ChEL02t01f01big.jpg • Průmyslové látky, produkty • • Kosmetická chemie •Potraviny / krmiva + kontakt s potravinami • •POR (pesticidy) •Biocidy •Léčiva humánní • •Léčiva veterinární • Chemické látky („bulk“) REACH (ECHA) PPP (EFSA) MPs (EMA) §§ §§ WFD – povrch.voda GWD – podzemní v. WWTP – odpadní v. Sedimenty Půda (SD) Ovzduší Odpady SOIL AIR WATER Negativní vlivy à vliv na zdraví člověka à vliv na prostředí Stresory - Chemické - Biologické (patogeny, GMO) - Fyzikální (záření, hluk...) Dva mechanismy “řízení” (§§) 1. před uvolněním – registrace 2. v prostředí 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Přehled - vybrané otázky v této přednášce •Zaměření kurzu na dvě hlavní oblasti –bezpečnost chemických látek (hlavní pozornost) –GMO (stručný přehled) • •Část 1 –Principy posuzování a řízení kvality prostředí (potravin…) •tj. retrospektivně (např. kvalita vody) –Principy řízení vybraných skupin látek •Průmyslové látky (REACH) •Pesticidy (Přípravky na ochranu rostlin) •Léčiva – (nejsou detailně diskutovány další velké skupiny ch. látek – biocidy, kosmetika, potraviny) • •Část 2 •Principy zjišťování bezpečnosti chemických látek –tj. prospektivně („registrace“) –Toxicita (zdraví lidí) vs Ekotoxicita (zdraví ekosystémů) –Biologické modely (in vivo, alternativy) – 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif http://www.mvcr.cz/ Kdo vlastně vyžaduje SLP ? … zákony 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Zdraví člověka principy kontroly a regulace 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Zdraví ovlivňuje řada faktorů, jejichž KVALITA musí být kontrolována (státem) a důležité je zajistit také “kvalitu” analýz (GLP): – - potraviny, pitná voda, rekreační voda, vnější ovzduší, pracovní ovzduší, hlučnost, léčiva – - zdravotní péče (vyšetření, analýzy … správná klinická praxe) • •Autority dohlížející na kvalitu = Ministerstva (MZe, MZd, MŽP) a zřizované ústavy (jejich kompetence a přesahy jsou předmětem diskuze) –Dozorující a výkonná funkce •Hygienické stanice •Státní zemědělská a potravinářská inspekce •Státní veterinární správa •SÚKL a ÚSKVBL (viz dále – léčiva) –Další funkce (např. poradní, analýzy …) •Státní zdravotní ústav •Zdravotní ústavy (zpr. krajské) •Státní veterinární ústav GLP a zdraví člověka 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Pro každou sledovanou kategorii, tj.: –Potraviny, Pitná voda, Rekreační voda, Ovzduší –Zdravotní péče • jsou definovány různé a specifické požadavky na kvalitu –Chemické rozbory - limity pro vybrané toxické látky (různé druhy potravin, různé limity): toxické kovy – př. Hg, toxiny plísní, persistentní látky (polychlorované bifenyly, dioxiny), pesticidy, nepovolené náhražky –Mikrobiologická bezpečnost - kultivace nebo jiný průkaz patogenů (např. metody molekulární biologie – Listerie v potravinách; sterilita léčiv podávaných intravenózně atd.) –Další specifické požadavky (prašnost – např. limity pro PM10 = particulate matter >10mikrometrů; limity pro hlučnost …) –Lékařská vyšetření a analýzy - např. průkaz rakovinných biomarkerů, biomarkery v těhotenství, přítomnost HIV … GLP a zdraví člověka 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Kdo sleduje (odpovídá za) kvalitu ? –výrobci (voda, potraviny…) + prodejci –zdroje znečištění (průmysl, čistírny odp. vod …) – •Odpověné osoby musí objednávat zkoušky/rozbory: • •Zajištění rozborů (pokud jde o požadavek zákona) = akreditované laboratoře –Vlastní laboratoře přímo u výrobce –Soukromé laboratoře –Státní zdravotní ústav, Zdravotní ústavy, Veterinární ústavy … • •Občan, NGO atd může také požadovat/objednat (a následně nejspíš i zaplatit) rozbory kvality – GLP a zdraví člověka 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif www.mzcr.cz 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Krajské hygienické stanice (www.khsbrno.cz) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif www.szpi.gov.cz 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif www.szu.cz 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Zdravotní ústavy (příspěvkové organizace) – např. www.zubrno.cz 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Státní veterinární správa à krajské veterinární správy (dozorující orgány jako KHS) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Státní veterinární ústav (příspěvková organizace MZe) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif LIMITY Jak se odvodí „bezpečné“ limity, které jsou pak uplatňovány v legislativě? 1 - zdraví člověka 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Limity pro (toxické) látky •Odvození limitů využívá data z konkrétních toxikologických studií –Využívají se dávky odvozené z toxikologických prací, nejčastěji •LD50 – odhadnutá (modelovaná) dávka, která je (po určité době expozice ve standardním – GLP – testu) letální pro 50% organismů (akutní, chronická) •NOEL (NOAEL) – no observed (adverse) effect level – hladina/dávka látky, která v konkrétních experimentech nevykazovala žádné (negativní) účinky • •Limity = doporučení zpravidla na nadnárodní úrovni (komise JECFA FAO/WHO) • •Základní „expoziční limity“ –TDI nebo ADI (tolerovatelný / přijatelný denní příjem), –PTWI (provizorní tolerovatelný týdenní příjem), –PMTDI (provizorní maximální tolerovatelný denní přívod) •(Ekvivalent v USA RfD – referenční dávka) • •Jednotky vyjadřování – mg/kg b.w./day (week) •Interpretace: –Denní expozice (odhadnutá v rozpětí až jednoho řádu), která při celoživotní expozici pravděpodobně nezpůsobí poškození zdraví. 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Důležité zkratky - limity •Potraviny –TDI / ADI – tolerable / acceptable daily intake –Léčiva v potravinách – MRL (maximum residual level) – •Pitná voda –Kromě běžných limitů se uplatňuje také „hazard-based“ přístup pro koncentrace pesticidů –Žádný pesticid nesmí být v koncentraci vyšší než 0,01 ug/L –Arbitrárně (dohodu) stanovený „Threshold of toxicological concern“ (TTC) – •Vnější ovzduší –Maximální denní limity (např. prachové částice PM10) – •Pracovní prostředí –Threshold limit value (TLV) –Permissible exposure limit (PEL) –Short-term exposure limit (STEL) –Timeweighted averages (TWA) –Immediately dangerous to life or health value (IDLH)- 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Maximální množství reziduí, které může být denně přijímáno v potravě člověka bez zdravého rizika. ADI = NOEL (mg/kg ž.hm.) * standardní váha člověka (kg) safety factor No observed effect level z chronické studie toxicity Př.: Na základě výsledků toxicity po opakované dávce látky valnemulinu je NOEL 8 mg/kg/den; průměrná váha člověka 60 kg: ADI = 8 * 60 = 4,8 mg/den 100 mikrobiologický NOEL: ADI = 2,7 mg/den Acceptable Daily Intake (ADI) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Hodnota, která snižuje riziko reziduí pro člověka při extrapolaci výsledků toxicity ze zvířat na člověka. Snižuje hodnotu NOEL 10 – 1 000x dle těchto kritérií: •látky s teratogenním účinkem hodnota 1 000, •nejsou-li výsledky chronické toxicity SF > 100 nebo 200, •jsou-li známy údaje z chronické toxicity, pak SF = 100, •jsou-li známy výsledky humánních testů SF =10. Bezpečnostní (safety) faktory / Faktory nejistoty 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Uvažují se následující průměrné denní dávky živočišných potravin: • •500 g masa (300 g svaloviny, 100 g jater, 50 g ledvin, 50 g tuku), •1 500 g mléka, •100 g vajec, •20 g medu. bezpečná koncentrace (ppm) = ADI gramy spotřebované/den Bezpečná koncentrace (SC – safe concentration) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif LIMITY Jak se odvodí „bezpečné“ limity, které jsou pak uplatňovány v legislativě? 2 – kvalita prostředí: příklad VODA 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif EU WFD - rámcová směrnice o vodách •Cíl EU WFD = dobrý stav vody – –2 komponenty hodnocení kvality: „ekologická“ a „chemická“ – –Chemická komponenta: 3 seznamy látek •Seznam prioritních látek –Dobrá kvalita = koncentrace < NEK (Normy environmentální kvality, anglicky EQS) RP-NEK – roční průměrná koncentrace NPK –NEK – nejvyšší přípustná koncentrace •Seznam sledovaných látek („watch list“) •Seznam specifických polutantů –Dle plánů povodí („river basin specific pollutants) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif http://www.scotland.gov.uk/Resource/Img/237458/0069907.jpg 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Seznam prioritních látek EU WFD (výběr, příklady) Aktuálně (2015) seznam 44 prioritních látek (viz dole) + seznam „sledovaných látek“ (watch list) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Odvození limitů 1)Experimentální ekotoxikologie à EC50 a/nebo NOEC z biotestů 2)Extrapolace à odvození PNEC (Predicted No Effect Concentration) 3)Přijetí do legislativy (politické)àEQS (Normy environmentální kvality) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif • • • • • • • • • Faktory nejistoty pro odvození PNEC hodnot (Guidance Document EU CIS-WFD No. 27) Faktory nejistoty - příklady 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Dostupná data Assessment factor L(E)C50 short-term toxicity tests NOEC for 1 long-term toxicity test NOEC for additional long-term toxicity tests of 2 trophic levels NOEC for additional long-term toxicity tests of 3 species of 3 trophic levels 1000 100 50 10 Protection level: 95% Hodnoty ekotox. EC50 / NOEC Species sensitivity distribution (SSD) statistická metoda – zohlední dostupná data = EC50 více druhů HC5 = 95% protection level [C] PNEC (limity, EQS) Extrapolace pomocí faktorů (příklady) à odvození PNEC = bezpečná koncentrace à nastavení „limitů“ (EQS – environmental quality standards) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Bezpečnost průmyslových chemických látek 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Jsou nebezpečné/toxické látky regulovány ? •Do nedávna – povinnost průmyslu prokazovat bezpečnost chemikálií velmi nepřehledná •Řada různých (protichůdných) regulací •Současnost –EU = sjednocení – nová legislativa REACH –USA, Japonsko, Canada atd. – podobný vývoj • •Kromě toho existují direktivy pro specifické skupiny chemických látek –Léčiva –Pesticidy –Biocidy –Kosmetické látky 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •REACH = Registration, Evaluation and Authorisation of Chemicals REACH - REGULACE chem. látek v EU 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Evropská unie - ECHA (European Chemical Agency) http://echa.europa.eu/ REACH - REGULACE chem. látek v EU 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif INNITIAL ESTIMATED NUMBER OF PHASE-IN SUBSTANCES: 30,000 REGISTERED SUBSTANCES IN ECHA (data from 31st March 2011)1 : 2,452 [1 ECHA, Information on registred substances: http://apps.echa.europa.eu/registered/registered-sub.aspx REACH - REGULACE chem. látek v EU 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Všechny chemikálie vyráběné nebo dovážené do EU musí být registrovány, zhodnoceny (testovány) a autorizovány (náklady nese průmysl) • •Zhodnocení rizik – cca 30000 chemikálií –– harmonogram dle důležitosti (nejdříve HVP - High Volume Production chemicals > 1000 t/rok, postupně ostatní • •Hodnocené parametry (požadovány “kvalitní” výsledky – zajištění dle GLP apod.) –Fyz.chem. vlastnosti + degradabilita, persistence –Toxicita pro člověka –Nebezpečnost pro prostředí = ekotoxicita • •Definování látek s velkým významem REACH - REGULACE chem. látek v EU 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Látky s velkým významem (nebezpečnost) - Annex XIV –SVHC = Substances of Very High Concern •Toxický pro reprodukci a/nebo Karcinogenní a/nebo Mutagenní a/nebo PBT (Persistentní Bioakumulativní Toxický) a/nebo vPvB (velmi P velmi B) •à potenciální zákaz! Nesmí jít na trh a být užívány – –1) Candidate list: 22 látek (2014) – musí být zhodnoceny –http://echa.europa.eu/chem_data/authorisation_process/candidate_list_table_en.asp –2) ECHA doporučuje („recommendiation“) Evropské komisi zákaz vybraných látek REACH - REGULACE chem. látek v EU 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif http://echa.europa.eu/addressing-chemicals-of-concern/authorisation/recommendation-for-inclusion-in -the-authorisation-list 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif REACH - testování 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif REACH - testování 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Přípravky na ochranu rostlin (pesticidy) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Zákon o rostlinolékařské péči – Z. 326/2004 Sb •Tento zákon upravuje práva a povinnosti fyzických a právnických osob, týkající se –ochrany rostlin a rostlinných produktů proti škodlivým organismům a ochrany proti zavlékání organismů škodlivých rostlinám nebo rostlinným produktům do České republiky –registrace, uvádění na trh, používání a kontroly přípravků na ochranu rostlin, –omezování nepříznivého vlivu použití přípravků a dalších prostředků na zdraví lidí, zvířat a na životní prostředí, • •POR – Přípravky na ochranu rostlin –Lidově „pesticidy“, z hlediska zákona se odlišují „biocidy“ a také léčivé přípravky („př. antiparazitika“) –Podobně jako léčiva – bioaktivní látky s vysokým potenciálem vedlejších účinků • •Prováděcí vyhláška: Vyhláška č. 32/2012 Sb., o přípravcích a dalších prostředcích na ochranu rostlin • 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Označování POR Fundazol 50 WP Obchodní název Obsah účinné složky (%) Zbytek do 100% - přídatné látky benomyl – obecný název VINCLOZOLIN: /S/-3-/3,5-dichlorfenyl- 5-metyl-5-vinyl-1,3-oxazolidin-2,4-dion EC = emulgované koncentráty WP = smáčitelné prášky SL = rozpustné koncentráty SC = suspenzní koncentráty WG = ve vodě dispergovatelné granule 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Registrace –Lze používat jen registrované přípravky –Hodnocení přípravků •Ověření vlastností, účinnosti, bezpečnosti … •Kontrola životního cyklu –Používání jen v souladu s doporučeními –Nebezpečný odpad .. •Autority –EU – EFSA –ČR – ÚKZÚS • •Odkazy: –DG SANCO •http://ec.europa.eu/food/plant/protection/index_en.htm •http://ec.europa.eu/food/plant/protection/evaluation/index_en.htm •http://ec.europa.eu/food/plant/protection/evaluation/database_act_subs_en.htm –EFSA •http://www.efsa.europa.eu/en/praper/praperscdocs.htm •http://www.efsa.europa.eu/en/panels/praper.htm • POR – základní principy regulace 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Registrace POR – rozsáhlá žádost à Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Toxikologické studie u přípravků na ochranu rostlin (POR) –akutní orální toxicita –akutní dermální toxicita –akutní inhalační toxicita –studie kožní dráždivosti –studie oční dráždivosti –studie senzibilizace • •Hodnocení nebezpečnosti POR pro zdraví –1. Toxicita POR - předložené toxikologické studie - ve většině případů –2. Další nebezpečné vlastnosti určují (počítají) se z vlastností účinné látky a koformulantů - konvenční výpočtová metoda (+ individuální koncentrační limity) • Přípravky na ochranu rostlin – požadavky při registraci 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif POR – od 2014 zajišťuje ÚKZÚZ (dříve SRS – Státní Rostlinolékařská Správa) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Na úrovni EU – hlavní agenda: EFSA a její databáze 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Léčiva … a správná praxe 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Léčiva – základní údaje •V ČR registrováno –více než 50 000 variant léků a léčebných přípravků –obsahujících více než 1000 aktivních látek •V UK v roce 2000 registrováno více než 3 000 aktivních látek • •Graficky - příklad Norsko (2010) à http://images.slideplayer.com/23/6850197/slides/slide_2.jpg 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Vývoj nových léčiv 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Internet Pfizer Vývoj nových léčiv 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Léčiva – základní údaje •„Nebezpečné“ faktory užívání léčiv –Léky dále obsahují i pomocné látky, plniva, pigmenty, vosky, tmelící látky –kromě léčiv se ve zdravotnictví používají např. i diagnostické látky (kontrastní látky NMR), dezinfekce –látky přirozeně bioaktivní •interakce látek ve směsích •dlouhodobé účinky v nízkých koncentracích ? 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Jednotlivá léčiva mají různý profil bezpečnosti/účinnosti: účinná látka léčebná hladina/dávka toxická hladina/dávka aminofylin 44 - 111 μmol/l > 110 μmol/l digoxin 1 – 1.9 nmol/l > 3.2 nmol/l gentamicin 2 – 8 μmol/l 4 – 8 μmol/l fenbendazol 5 – 50 mg/kg 100x vyšší (10gm/kg – lab.) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Farmaka pro humánní medicínu Farmaka pro veterinární medicínu Exkrece (odpadní vody z nemocnic) Exkrece (odpadní vody z domácností) Komunální odpad (nevyužité léky) Exkrece Čistírna odpadních vod Popelnice Hnůj, kompost Zpracování kalů Povrchová voda Skládka Upravený kal Půda Podzemní voda Pitná voda Výroba farmak Vodní mikroflóra Upraveno podle: T.Heberer, Toxicology Letters 131, 5 – 17 (2002) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif GLP a Léčiva •GLP & přesná dokumentace vyžadována u humánních i veterinárních léčiv: •Registrace před použitím –průkaz a dokumentace farmakokinetiky, cílové aktivity ve srovnání s existujícími postupy, bezpečnost pro lidi + nově i pro životní prostředí … •Dokumentace celého životního cyklu –výroba, přípravy v lékárnách, kontrola kvality, aplikace, reporting vedlejších účinků, likvidace (nebezpečný odpad) • •Autority: –ČR •SÚKL (Státní úřad pro kontrolu léčiv) •ÚSKVBL (Ústav pro státní kontrolu veterinárních biopreparátů a léčiv) –EU: Evropská léková agentura (EMA) –USA: Food and Drug Administration (FDA) 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif www.uskvbl.cz 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif •Základní zákonný dokument: •Zákon o léčivech č. 378/2007 v platném znění (časté aktualizace) •a příslušné prováděcí vyhlášky • (viz příklad ve studijních materiálech) • • •Pro informaci: další zákony v kompetenci SÚKL –Zákon č. 167/1998 Sb., o návykových látkách a o změně některých dalších zákonů, ve znění pozdějších předpisů –Zákon č. 160/1992 Sb., o zdravotní péči v nestátních zdravotnických zařízeních • • GLP a Léčiva 1212569_21823227.jpg logo_mu_cerne.gif Prováděcí předpisy k zák. 378/2007 (výběr - příklady) •vyhláška č. 229/2008 Sb., o výrobě a distribuci léčiv, ve znění pozdějších předpisů •vyhláška č. 228/2008 Sb., o registraci léčivých přípravků, ve znění pozdějších předpisů •vyhláška č. 106/2008 Sb., o správné praxi prodejců vyhrazených léčivých přípravků a o odborném kurzu prodejců vyhrazených léčivých přípravků •vyhláška č. 226/2008 Sb., o správné klinické praxi a bližších podmínkách klinického hodnocení léčivých přípravků, ve znění pozdějších předpisů •vyhláška č. 54/2008 Sb., o způsobu předepisování léčivých přípravků, údajích uváděných na lékařském předpisu a o pravidlech používání lékařských předpisů, ve znění pozdějších předpisů •vyhláška č. 84/2008 Sb., o správné lékárenské praxi, bližších podmínkách zacházení s léčivy v lékárnách, zdravotnických zařízeních a u dalších provozovatelů a zařízení vydávajících léčivé přípravky, ve znění pozdějších předpisů •(viz příklad – studijní materiály) vyhláška č. 85/2008 Sb., o stanovení seznamu léčivých látek a pomocných látek, které lze použít pro přípravu léčivých přípravků, ve znění pozdějších předpisů •(viz příklad – studijní materiály) vyhláška č. 86/2008 Sb., o stanovení zásad správné laboratorní praxe v oblasti léčiv, ve znění pozdějších předpisů •vyhláška č. 143/ 2008 Sb., o stanovení bližších požadavků pro zajištění jakosti a bezpečnosti lidské krve a jejích složek (vyhláška o lidské krvi), ve znění pozdějších předpisů