Příprava mAb proti rekombinantí formě OspC Borrelia burgdorferi sensu lato

NOREK, Adam, Lubomír JANDA and Alena ŽÁKOVSKÁ. Příprava mAb proti rekombinantí formě OspC Borrelia burgdorferi sensu lato (Preparation of mAb against recombinant form of OspC of Borrelia burgdorferi sensu lato). In Český kongres o infekčních nemocech 2013. 2013. ISBN 978-80-260-4768-1.

Basic information

• Original name: Příprava mAb proti rekombinantí formě OspC Borrelia burgdorferi sensu lato
• Name in Czech: Příprava mAb proti rekombinantí formě OspC Borrelia burgdorferi sensu lato
• Name (in English): Preparation of mAb against recombinant form of OspC of Borrelia burgdorferi sensu lato
• Authors: NOREK, Adam (203 Czech Republic, guarantor, belonging to the institution), Lubomír JANDA (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Alena ŽÁKOVSKÁ (203 Czech Republic, belonging to the institution).
• Edition: Český kongres o infekčních nemocech 2013, 2013.

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Conference abstract
• Field of Study: 30102 Immunology
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• RIV identification code: RIV/00216224:14310/13:00072616
• Organization unit: Faculty of Science
• ISBN: 978-80-260-4768-1
• Keywords (in Czech): OspC Borrelia burgdorferi monoclonal Ab
• Keywords in English: OspC Borrelia burgdorferi monoclonal Ab

Abstract

Lymeská borrelióza je multisystémové bakteriální onemocnění, jehož původcem je bakterie Borrelia burgdorferi sensu lato (Bbsl). Mezi hlavní fyziologické rysy této spirochety patří bohatá antigenní výbava, která jí umožňuje adaptaci na široké spektrum hostitelů. Jedním z hlavních antigenů je lipoprotein OspC. Exprese OspC je indukována v první fázi sání klíštěte a je nezbytný po transmisi spirochet do obratlovčího hostitele. Jedná se tedy o jeden z prvních antigenů, na který imunitní systém reaguje a aktivně vytváří protektivní protilátky. Vznikající protilátky jsou ovšem schopné plně vázat jen specifický fylogenetický typ OspC, který jejich tvorbu vyvolal. Cílem naší práce bylo navrhnou, připravit a purifikovat rekombinantní formu OspC relevantní pro území České republiky a připravit sadu myších monoklonálních protilátek (mAb) schopných vázat přirozený antigen jednoho nebo více kmenů Bbsl a mohl by tak být základem pro imunologické testy s vysokou specifitou pro naše území. Námi navržený rekombinantní OspC (OspCEX) vychází z kmene B. afzelii BRZ42 izolovaného z klíštěte získaného při teréních sběrech v Brně - Pisárkách. Gen ospC byl pomocí specifických primerů upraven tak, aby počátek čtecího rámce začínal na kodonu odpovídajícím 35. aminokyselině OspC (kyselina asparagová) včetně signální sekvence, respektive 14. aminokyselině nativní formy OspC. Prvních 13 aminokyselin bylo odštěpeno z důvodu zvýšení rozpustnosti navrhovaného proteinu. Konzervovaná C-koncová oblast byla v rekombinantním OspC zachována. Konstrukt byl zaklonován do expresního vektroku pET M60 UbIII, nesoucí histidinovou kotvičku, gen pro ubiquitin a specifickou sekvenci pro hydrolýzu TEV proteázou. Syntetizovaný protein byl purifikován pomocí afinitní chromatografie, hydrolyzován TEV proteázou a repurifikován. Výsledná zkrácená verze BA_BRZ42_OspCEX o čistotě 98% byla použita pro imunizaci myší za účelem izolace monoklonálních protilátek. Z testovaných hybridomů bylo vybráno 9 linií, které se liší ve schopnosti vázat přirozené celobuněčné antigeny (B. burgdorferi sensu sticto, B. afzeli a B. garini) i rekombinantní zkrácené varianty těchto proteinu a to buď v roztoku (ELISA) nebo v denaturované podobě (Western-blot), popřípadě v kombinaci s různou afinitou k testovaným antigenům.

Abstract (in English)

Lyme disease is a multisystem bacterial disease caused by the bacterium Borrelia burgdorferi sensu lato ( Bbsl ). The main physiological features of this spirochete, the rich antigenic feature, which allows it to adapt to a wide range of hosts. One of the major antigens of the OspC lipoprotein . OspC expression is induced in the first phase tick feeding is required after transmission of spirochete to obratlovčího host. It is thus one of the first antigen to which the immune system reacts actively produces protective antibodies . The resulting antibodies , however, are fully capable of binding a specific phylogenetic type OspC , which caused their formation . The aim of our study was to design , prepare and purify recombinant OspC form relevant to the Czech Republic and prepare a set of mouse monoclonal antibodies ( mAb) capable of binding the native antigen of one or more strains Bbsl and might be the basis for immunological tests with high specificity for our country.