2017
Electrophoretically mediated microanalysis for simultaneous on-capillary derivatization of standard amino acids followed by micellar electrokinetic capillary chromatography with laser-induced fluorescence detection
CELÁ, Andrea, Aleš MÁDR and Zdeněk GLATZBasic information
Original name
Electrophoretically mediated microanalysis for simultaneous on-capillary derivatization of standard amino acids followed by micellar electrokinetic capillary chromatography with laser-induced fluorescence detection
Name in Czech
Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza pro současnou derivatizaci standardních aminokyslin v kapiláře následovaná micelární elektrokinetickou kapilární chromatografií s laserem-indukovanou fluorescenční detekcí
Authors
CELÁ, Andrea (203 Czech Republic, belonging to the institution), Aleš MÁDR (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Zdeněk GLATZ (203 Czech Republic, belonging to the institution)
Edition
Journal of Chromatography A, Amsterdam, Netherlands, Elsevier Science BV, 2017, 0021-9673
Other information
Language
English
Type of outcome
Article in a journal
Field of Study
10600 1.6 Biological sciences
Country of publisher
Netherlands
Confidentiality degree
is not subject to a state or trade secret
Impact factor
Impact factor: 3.716
RIV identification code
RIV/00216224:14310/17:00095072
Organization unit
Faculty of Science
UT WoS
000401394200022
Keywords (in Czech)
kapilární elektroforéza; elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza; aminokyseliny; derivatizace v kapiláře; metabolomika lidských embryí; příčná difuze v laminárním toku
Keywords in English
Capillary electrophoresis; Electrophoretically mediated microanalysis; Amino acids; On-capillary derivatization; Human embryo metabolomics; Transverse diffusion of laminar flow profiles
Tags
International impact, Reviewed
Changed: 6/2/2019 11:52, prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
V originále
Amino acids are crucial compounds involved in most biochemical processes essential for life. Since their dynamic turnover reflects the actual physiology of the cell/organism, a turnover assessment may provide valuable information related to multiple physiological and pathophysiological conditions. The sensitive determination of amino acids is predominantly associated with their derivatization which might be laborious, time-consuming and difficult to standardize. However, capillary electrophoresis offers the automatic injection and mixing of reactants, incubation of the reaction mixture, separation and detection of the reaction products in one on-capillary procedure. Among the on-capillary mixing strategies, electrophoretically mediated microanalysis (EMMA) is superior in terms of mixing efficiency. In this paper, we present an optimization of EMMA for the simultaneous derivatization of standard amino acids by naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde/NaCN and its application to targeted human embryo metabolomics. For such a purpose, novel separation conditions were developed involving the background electrolyte, comprised of 73 mM sodium dodecyl sulfate, 6.7 % (v/v) 1-propanol, 0.5 mM (2-hydroxypropyl)-beta-cyclodextrin and 135 mM boric acid/sodium hydroxide buffer (pH 9.00). Finally, the optimized EMMA was compared to a fundamentally different mixing strategy, namely the transverse diffusion of laminar flow profiles, and proved to be also suitable for human plasma analysis.
In Czech
Aminokyseliny jsou pro život nezbytné biomolekuly, které jsou zapojeny v mnoha biochemických procesech. Jelikož jejich dynamické změny odráží aktuální fyziologii buňky/organismu, stanovení těchto změn poskytuje cenné informace vypovídající o mnoha fyziologických a patofyziologických stavech. Citlivé stanovení aminokyselin je nejčastěji spojováno s jejich derivatizací, jež bývá pracná, časově náročná a obtížně standardizovatelná. Kapilární elektroforéza ale umožňuje automatické dávkování a míchání reaktantů, inkubaci reakční směsi, separaci a detekci produktů reakce v jednom procesu probíhajícím přímo v kapiláře. Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza (EMMA) vyniká oproti ostatním stategiím míchání reaktantů v kapiláře vyšší účinností míchání. V tomto článku je představena optimalizace metody EMMA pro současnou derivatizaci standardních aminokyselin naftalen-2,3-dikarboxaldehydem/NaCN a její aplikace pro cílenou metabolomiku lidských embryí. K tomuto účelu byly vyvinuty nové separační podmínky se složením základního elektrolytu 73 mM dodecylsulfát sodný, 6.7 % (v/v) 1-propanol, 0.5 mM (2-hydroxypropyl)-beta-cyklodextrin a 135 mM kyselina boritá/hydroxid sodný (pH 9.00). Optimalizovaná metoda EMMA byla nakonec srovnána s principiálně odlišnou metodou míchání - příčnou difuzí v laminárním toku - a ukázala se také vhodnou pro analýzu lidské plazmy.
Links
| GBP206/12/G014, research and development project |
| ||
| MUNI/A/1278/2016, interní kód MU |
|