SCHEJBAL, Jan, Šárka ŠEFRANÁ, Roman ŘEMÍNEK and Zdeněk GLATZ. Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactor for kinetic and inhibition assays of beta-secretase as the Alzheimer's disease drug target. Journal of Separation Science. Weinheim: WILEY-VCH Verlag GmbH & Co., 2019, vol. 42, No 5, p. 1067-1076. ISSN 1615-9306. Available from: https://dx.doi.org/10.1002/jssc.201800947.
Other formats:   BibTeX LaTeX RIS
Basic information
Original name Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactor for kinetic and inhibition assays of beta-secretase as the Alzheimer's disease drug target
Authors SCHEJBAL, Jan (203 Czech Republic, belonging to the institution), Šárka ŠEFRANÁ (203 Czech Republic, belonging to the institution), Roman ŘEMÍNEK (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Zdeněk GLATZ (203 Czech Republic, guarantor, belonging to the institution).
Edition Journal of Separation Science, Weinheim, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. 2019, 1615-9306.
Other information
Original language English
Type of outcome Article in a journal
Field of Study 10406 Analytical chemistry
Country of publisher Germany
Confidentiality degree is not subject to a state or trade secret
WWW Full Text
Impact factor Impact factor: 2.878
RIV identification code RIV/00216224:14310/19:00107212
Organization unit Faculty of Science
Doi http://dx.doi.org/10.1002/jssc.201800947
UT WoS 000461674900013
Keywords in English beta-secretase; capillary electrophoresis; immobilized enzyme reactor; inhibition; magnetic particles
Tags rivok
Tags International impact, Reviewed
Changed by Changed by: Mgr. Marie Šípková, DiS., učo 437722. Changed: 12/3/2020 11:51.
Abstract
Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactors are becoming an increasingly popular alternative for enzyme kinetic and inhibition assays thanks to their unique set of features including cost effectiveness, repeated use of the enzyme, minuscule sample consumption, rapid analysis time and easy automation. In this work we present the development and application of a CE-integrated immobilized enzyme reactor based on magnetic particles for kinetic and inhibition studies of beta secretase, a key enzyme in the development of Alzheimer’s disease and a promising drug target. We document the optimization of the immobilization procedure, characterization of immobilized beta secretase, optimization of a mutually compatible incubation protocol and separation method as well as the production of the CE-integrated immobilized enzyme reactor. The applicability of the CE-integrated immobilized enzyme reactor was demonstrated by kinetic assay with an unlabelled substrate and by inhibition assays using three structurally different reference inhibitors. The resulting kinetic and inhibition parameters clearly support the applicability of the herein presented method as well as document the fundamental phenomena which need to be taken in account when comparing the results to other methods.
Abstract (in Czech)
Reaktory z imobilizovaných enzymů integrovaných do kapilární elektroforézy představují stále populárnější alternativu pro enzymová kinetická a inhibiční stanovení díky jejich jedinečnému souboru vlastností včetně ekonomičnosti, opakovanému použití enzymu, minimální spotřebě vzorku, rychlé analýze a jednoduché automatizaci. V této práci představujeme vývoj a aplikaci reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE založeného na magnetických částicích pro kinetické a inhibiční stanovení beta sekretázy, klíčového enzymu v rozvoji Alzheimerovy choroby a slibného cíle léčiv. Dokumentujeme optimalizaci imobilizačního postupu, charakterizaci imobilizované beta sekretázy, optimalizaci vzájemně kompatibilního inkubačního protokolu a separační metody, stejně tak jako tvorbu reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE. Použitelnost reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE byla demonstrována kinetickým stanovením pomocí neznačeného substrátu a inhibičními stanoveními za využití tři strukturně odlišných referenčních inhibitorů. Výsledné kinetické a inhibiční parametry jasně podporují použitelnost zde prezentované metody stejně jako dokumentují zákonitosti, na které je nutné brát zřetel při porovnávání výsledků s jinými metodami.
Links
GA16-06106S, research and development projectName: Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu (Acronym: Alzheimer)
Investor: Czech Science Foundation
PrintDisplayed: 4/5/2024 21:03