k 2019

Structure of a staphylococcal phage connector protein

BŘENKOVÁ, Barbora, Marta ŠIBOROVÁ, Jiří NOVÁČEK, Pavol BÁRDY, Roman PANTŮČEK et. al.

Basic information

Original name

Structure of a staphylococcal phage connector protein

Name in Czech

Struktura konektorového proteinu u stafylokokového fága

Authors

BŘENKOVÁ, Barbora, Marta ŠIBOROVÁ, Jiří NOVÁČEK, Pavol BÁRDY, Roman PANTŮČEK and Pavel PLEVKA

Edition

XVI. Discussions in Structural Molecular Biology, 2019

Other information

Language

English

Type of outcome

Prezentace na konferencích

Country of publisher

Czech Republic

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

References:

Organization unit

Central European Institute of Technology

Keywords (in Czech)

S. aureus, konektor, rentgenová krystalografie, kryo-elektronová mikroskopie

Keywords in English

S. aureus, connector, X-ray crystallography, cryo electron microscopy
Změněno: 6/10/2020 20:20, Mgr. Barbora Popelářová

Abstract

ORIG CZ

V originále

Antibiotic resistance of microorganisms is a major threat accounting for a rising number of deaths. Bacteriophages offer an alternative to conventional antimicrobial treatment. Phage phi812 is a lytic virus from the Myoviridae family infecting up to 95 % of Staphylococcus aureus strains, including MRSA and its structure was previously determined by cryo-electron microscopy. Here we present our work towards resolving the structure of protein gp99 forming the connector region. The protein may play a role in genome release regulation during infection. Gp99 was overexpressed in E. coli and purified by affinity and size exclusion chromatography. A suitable crystallization condition was found and X-ray diffraction data with a resolution of 2.2 Å were collected. To solve the phase problem, a variety of methods had been tried, including molecular replacement, heavy atom soaking, co-crystallization, and seleno-methionine incorporation. The structure of gp99 will help explain the mechanism of bacterial infection by bacteriophage.

In Czech

Rezistence k antibiotikům je u mikroorganismů významnou hrozbou zodpovídající za vzrůstající počet úmrtí. Bakteriofágy mohou být alternativou ke konvenční antimikrobiální léčbě. Fág phi812 je lytický virus z čeledi Myoviridae schopný infikovat až 95 % kmenů Staphylococcus aureus, včetně MRSA. Jeho struktura byla dříve vyřešena metodou kryo-elektronové mikroskopie. Zde jsou prezentovány výsledky práce směřující k vyřešení struktury proteinu gp99, který tvoří konektor. Tento protein může hrát roli v regulaci uvolnění genomu během infekce. Gp99 byl exprimován v E. coli a purifikován afinitní chromatografií a gelovou filtrací. Byla nalezena vhodná krystalizační podmínka a získána rentgenová difrakční data o rozlišení 2.2 Å. Pro vyřešení fázového problému byly vyzkoušeny metody jako molekulární nahrazení a inkorporace selenomethioninu či těžkých atomů. Struktura proteinu gp99 pomůže objasnit mechanismus bakteriální infekce bakteriofágem.