Structure of a staphylococcal phage connector protein

BŘENKOVÁ, Barbora, Marta ŠIBOROVÁ, Jiří NOVÁČEK, Pavol BÁRDY, Roman PANTŮČEK and Pavel PLEVKA. Structure of a staphylococcal phage connector protein. In XVI. Discussions in Structural Molecular Biology. 2019.

Basic information

• Original name: Structure of a staphylococcal phage connector protein
• Name in Czech: Struktura konektorového proteinu u stafylokokového fága
• Authors: BŘENKOVÁ, Barbora, Marta ŠIBOROVÁ, Jiří NOVÁČEK, Pavol BÁRDY, Roman PANTŮČEK and Pavel PLEVKA.
• Edition: XVI. Discussions in Structural Molecular Biology, 2019.

Other information

• Original language: English
• Type of outcome: Presentations at conferences
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• WWW: URL
• Organization unit: Central European Institute of Technology
• Keywords (in Czech): S. aureus, konektor, rentgenová krystalografie, kryo-elektronová mikroskopie
• Keywords in English: S. aureus, connector, X-ray crystallography, cryo electron microscopy

Abstract

Antibiotic resistance of microorganisms is a major threat accounting for a rising number of deaths. Bacteriophages offer an alternative to conventional antimicrobial treatment. Phage phi812 is a lytic virus from the Myoviridae family infecting up to 95 % of Staphylococcus aureus strains, including MRSA and its structure was previously determined by cryo-electron microscopy. Here we present our work towards resolving the structure of protein gp99 forming the connector region. The protein may play a role in genome release regulation during infection. Gp99 was overexpressed in E. coli and purified by affinity and size exclusion chromatography. A suitable crystallization condition was found and X-ray diffraction data with a resolution of 2.2 Å were collected. To solve the phase problem, a variety of methods had been tried, including molecular replacement, heavy atom soaking, co-crystallization, and seleno-methionine incorporation. The structure of gp99 will help explain the mechanism of bacterial infection by bacteriophage.

Abstract (in Czech)

Rezistence k antibiotikům je u mikroorganismů významnou hrozbou zodpovídající za vzrůstající počet úmrtí. Bakteriofágy mohou být alternativou ke konvenční antimikrobiální léčbě. Fág phi812 je lytický virus z čeledi Myoviridae schopný infikovat až 95 % kmenů Staphylococcus aureus, včetně MRSA. Jeho struktura byla dříve vyřešena metodou kryo-elektronové mikroskopie. Zde jsou prezentovány výsledky práce směřující k vyřešení struktury proteinu gp99, který tvoří konektor. Tento protein může hrát roli v regulaci uvolnění genomu během infekce. Gp99 byl exprimován v E. coli a purifikován afinitní chromatografií a gelovou filtrací. Byla nalezena vhodná krystalizační podmínka a získána rentgenová difrakční data o rozlišení 2.2 Å. Pro vyřešení fázového problému byly vyzkoušeny metody jako molekulární nahrazení a inkorporace selenomethioninu či těžkých atomů. Struktura proteinu gp99 pomůže objasnit mechanismus bakteriální infekce bakteriofágem.