Úloha cytotoxických gamma-delta T buněk na terapeutické rezistenci a recidivě Glioblastoma Multiforme

KNIGHT, Andrea, Barbora KOHLOVÁ, Martin PISKÁČEK, Vít ZMÁTLO, Marie TOMANDLOVÁ, Marek SOVA, Vilém JURÁŇ, Tomáš KAZDA, Václav VYBÍHAL and Pavel FADRUS. Úloha cytotoxických gamma-delta T buněk na terapeutické rezistenci a recidivě Glioblastoma Multiforme (Role of cytotoxic gamma-delta T cells in therapeutic resistance and recurrence of Glioblastoma Multiforme). In XLV. Brněnské onkologické dny. 2021. ISSN 0862-495X.

Basic information

• Original name: Úloha cytotoxických gamma-delta T buněk na terapeutické rezistenci a recidivě Glioblastoma Multiforme
• Name (in English): Role of cytotoxic gamma-delta T cells in therapeutic resistance and recurrence of Glioblastoma Multiforme
• Authors: KNIGHT, Andrea (203 Czech Republic, guarantor, belonging to the institution), Barbora KOHLOVÁ (203 Czech Republic, belonging to the institution), Martin PISKÁČEK (40 Austria, belonging to the institution), Vít ZMÁTLO (203 Czech Republic, belonging to the institution), Marie TOMANDLOVÁ (203 Czech Republic, belonging to the institution), Marek SOVA (203 Czech Republic, belonging to the institution), Vilém JURÁŇ (203 Czech Republic, belonging to the institution), Tomáš KAZDA (203 Czech Republic, belonging to the institution), Václav VYBÍHAL (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Pavel FADRUS (203 Czech Republic, belonging to the institution).
• Edition: XLV. Brněnské onkologické dny, 2021.

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Conference abstract
• Field of Study: 30204 Oncology
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• WWW: URL
• RIV identification code: RIV/00216224:14110/21:00120150
• Organization unit: Faculty of Medicine
• ISSN: 0862-495X
• Keywords (in Czech): Glioblastoma Multiforme; cytotoxické gamma-delta T buňky; terapeutická rezistence; recidiva
• Keywords in English: Glioblastoma Multiforme; cytotoxic gamma-delta T cells; therapeutic resistance; recurrence
• Tags: rivok

Abstract

Gamma-delta (γδ) T lymfocyty patří mezi významné efektorové buňky přirozené imunity s prokázanou protinádorovou reaktivitou proti agresivnímu nádoru mozku glioblastoma multiforme (GBM) (Knight et al., PLoS One 2013). Terapeutické přístupy imunoterapie GBM mají omezenou úspěšnost, zejména v důsledku ochranné bariéry mozku a imunosupresivního mikroprostředí nádoru. Cílem projektu je detailní analýza Vδ1 a Vδ2 populací γδ T lymfocytů infiltrovaných v nádorové tkáni a párových vzorcích periferní krve pacientů GBM. V projektu je zařazeno 33 pacientů GBM; 16 žen (48%) a 17 mužů (52%), medián věku pacientů byl 60 let (rozmezí 33-80let). Všichni pacienti byli operování na Neurochirurgické klinice FN Brno se snahou o maximální možnou cytoredukci a získání reprezentativních vzorků patologické tkáně. Po operaci byla u pacientů v Neuroonkologickém centru Brno na Neuroonkologické komisi MOÚ indikována komplexní onkologická terapie zahrnující standardní terapii podle Stuppova protokolu tj. konkomitantní chemo-radioterapií a adjuvantní chemoterapii temozolomidem, která včetně paliativních režimů probíhá na Klinice radiační onkologie a Klinice komplexní onkologické péče Masarykova onkologického ústavu. Populace CD3+Vδ1 γδ T buněk byla určena u zdravých dárců (HD, n=35, medián věku je 61 let) v periferní krvi průtokovou cytometrií v rozmezí 0,1-6,5% (medián 1,8%), CD3+Vδ2 γδ T lymfocyty u HD stanoveny v rozmezí 0,3-12,5% (medián 3,6%). U GBM pacientů byl nalezen signifikantní nárůst Vδ1 γδ T buněk (P<0,01) ve srovnání se zdravými dárci. Vδ2 γδ T buňky byly u GBM pacientů sníženy (P<0,05). Vzorky tumorů zpracováváme pomocí enzymatických kitů (disociátor Miltenyi), buněčné suspenze jsou analyzovány průtokovou cytometrií pro stanovení exprese receptorů NKG2D, DNAM1, TIGIT, PD-1 a Tim3. Nádorové buňky jsou fenotypovány protilátkami stresových ligandů MICA/B, ULBP a CD122, CD155. Dále jsme demonstrovali cytotoxickou reaktivitu γδ T lymfocytů vůči nádorovým liniím U251 a U373, a zejména vůči primárním nádorovým buňkám. Popsali jsme významnou úlohu EphA2 tyrosin kinázy v interakcích s Vδ1 T lymfocyty. Blokováním exprese EphA2 protilátkou a pomocí inhibitoru ALW-II-41-27 jsme pozorovali významné snížení specifické cytotoxicity. Analýza solubilních proteinů v plazmě pacientů metodou Luminex určila významně zvýšené hladiny MICA, check-point inhibitoru B7-H3 (CD276) a PD-L1 (B7-H1, CD274).

Abstract (in English)

Gamma-delta (γδ) T lymphocytes are among the important effector cells of natural immunity with proven antitumor reactivity against the aggressive brain tumor glioblastoma multiforme (GBM) (Knight et al., PLoS One 2013). Therapeutic approaches for immunotherapy of GBM have limited success, mainly due to the protective brain barrier and immunosuppressive tumor microenvironment. The aim of this project is to analyse in detail the Vδ1 and Vδ2 populations of γδ T cells infiltrating tumour tissue and paired peripheral blood samples from GBM patients. The project enrolled 33 GBM patients; 16 females (48%) and 17 males (52%), with a median age of 60 years (range 33-80 years). All patients were operated on at the Neurosurgery Department of the University Hospital Brno with the aim of maximal cytoreduction and obtaining representative samples of pathological tissue. After surgery, the patients were indicated for complex oncological therapy including standard therapy according to Stupp's protocol, i.e. concomitant chemo-radiotherapy and adjuvant chemotherapy with temozolomide, which including palliative regimens is performed at the Department of Radiation Oncology and the Department of Complex Oncological Care of the Masaryk Cancer Institute. CD3+Vδ1 γδ T cell population was determined in peripheral blood of healthy donors (HD, n=35, median age 61 years) by flow cytometry in the range of 0.1-6.5% (median 1.8%), CD3+Vδ2 γδ T cells in HD were determined in the range of 0.3-12.5% (median 3.6%). A significant increase in Vδ1 γδ T cells was found in GBM patients (P<0.01) compared to healthy donors. Vδ2 γδ T cells were decreased in GBM patients (P<0.05). Tumor samples were processed using enzyme kits (Miltenyi dissociator), and cell suspensions were analyzed by flow cytometry for the expression of NKG2D, DNAM1, TIGIT, PD-1 and Tim3 receptors. Tumor cells are phenotyped with antibodies to the stress ligands MICA/B, ULBP and CD122, CD155. We further demonstrated the cytotoxic reactivity of γδ T lymphocytes against tumor cell lines U251 and U373, and in particular against primary tumor cells. We described a significant role of EphA2 tyrosine kinase in interactions with Vδ1 T lymphocytes. By blocking EphA2 expression with an antibody and using the inhibitor ALW-II-41-27, we observed a significant reduction in specific cytotoxicity. Analysis of soluble proteins in patients' plasma by Luminex determined significantly increased levels of MICA, check-point inhibitor B7-H3 (CD276) and PD-L1 (B7-H1, CD274).

Links

• NV19-05-00410, research and development project: Name: Úloha cytotoxických gamma-delta T buněk na terapeutické rezistenci a recidivě Glioblastoma Multiforme

Investor: Ministry of Health of the CR