G 2021

Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů

MACHÁČOVÁ, Eliška, Matěj PASTUCHA, Dorota SKLENÁROVÁ, Petr SKLÁDAL, Zdeněk FARKA et. al.

Basic information

Original name

Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů

Name (in English)

Immunoassay ULISA for the detection of honeybee pathogens

Authors

MACHÁČOVÁ, Eliška (203 Czech Republic, belonging to the institution), Matěj PASTUCHA (203 Czech Republic, belonging to the institution), Dorota SKLENÁROVÁ (703 Slovakia, belonging to the institution), Petr SKLÁDAL (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Zdeněk FARKA (203 Czech Republic, guarantor, belonging to the institution)

Edition

2021

Other information

Language

Czech

Type of outcome

Technicky realizované výsledky (prototyp, funkční vzorek)

Field of Study

10406 Analytical chemistry

Country of publisher

Czech Republic

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

RIV identification code

RIV/00216224:14740/21:00123368

Organization unit

Central European Institute of Technology

Keywords in English

immunoassay; photon-upconversion nanoparticle; ULISA; american foulbrood; Peanibacillus larvae

Technical parameters

Imunochemické stanovení s využitím foton-upkonverzních nanočástic jako značky pro detekci bakterie Paenibacillus larvae prováděné v 96jamkových mikrotitračních destičkách. Poskytuje limit detekce 2.9×10^3 CFU/mL.

Tags

Změněno: 28/2/2022 09:49, Mgr. Pavla Foltynová, Ph.D.

Abstract

V originále

Byla vyvinuta a optimalizována metoda pro laboratorní diagnostiku nákazy včel morem včelího plodu. Analýza je založená na detekci bakterie Peanibacillus larvae, připravená anti-P. larvae protilátka je využita pro specifické zachycení bakterie v imunostanovení využívajícím foton-upkonverzní nanočástice (UCNPs) jako značku. S využitím linkeru na bázi polyethylenglykolu byly UCNPs konjugovány s protilátkou nebo streptavidinem, tento detekční prvek byl poté použit jako alternativa ke klasickému značení v enzymovém imunostanovení ELISA (enzyme-linked imunosorbent assay). Metoda ULISA (upconversion-linked immunosorbent assay) založená na UCNPs poskytuje limit detekce 2,9×10^3 CFU/ml, což představuje 22násobné zlepšení oproti ELISA stanovení. Analýza byla úspěšně aplikována také na reálných vzorcích včel, larev a měli. Dosažené výsledky ukazují vhodnost metody pro laboratorní diagnostiku nákazy včelstev morem včelího plodu.

In English

Method for the laboratory diagnosis of American foulbrood was developed and optimized. The analysis is based on the detection of the bacterium Paenibacillus larvae, the prepared anti-P. larvae antibody is used for the specific capture of the bacterium in an immunoassay using photon-upconversion nanoparticles (UCNPs) as a label. The UCNPs were conjugated with antibody or streptavidin using a linker based on polyethyleneglycol; this detection element was used as an alternative to conventional labeling in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The upconversion-linked immunosorbent assay (ULISA) based on UCNPs provides a detection limit of 2.9×10^3 CFU/mL, representing a 22-fold improvement compared to ELISA. The assay was successfully applied to analyze real samples of bees, larvae, and bottom hive debris. The achieved results demonstrate the suitability of the method for laboratory diagnosis of American foulbrood.

Links

LTAB19011, research and development project
Name: Luminiscenční imunostanovení jako citlivý nástroj pro diagnostiku nemocí včel
Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Sensitive bioanalytical tools for the surveillance of honey bee diseases, INTER-ACTION
MUNI/A/1604/2020, interní kód MU
Name: Podpora biochemického výzkumu v roce 2021
Investor: Masaryk University